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口蹄疫疫苗中药免疫佐剂的研究 萧琛闻陈婉君胡松华+ 浙江大学动物科学学院动物医学系，浙江杭州310029 摘要 从中药木鳖子中提取ECMS，将ECMS和商品口蹄疫疫苗混合注射豚鼠、奶牛和猪， 然后检测动物的血清抗体效价。研究表明，ECMS和口蹄疫疫苗混合后，可以使抗体效价升 高，有效期延长。因此，木鳖子提取物ECMS作为口蹄疫疫苗的佐剂值得进一步研究。 日U看 口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄动物烈性接触性传染病，主要危害牛、羊、猪等家畜。 该病的传播速度极快，可引起大范围流行，造成严重的经济损失[1】。人也可感染此病，但 症状较轻。国际兽疫局(OIE)将其列为A类传染病。已知的口蹄疫病毒包括A、o、C、Asia-i、 SATI、SAT2和SAT3七个血清型[2】。目前控制口蹄疫的方法主要有扑杀和疫苗接种两种。国 际上许多国家以后者为主要手段有效控制了口蹄疫的发生。例如，最近报道畜牧业大国阿根 廷采用疫苗免疫接种的方法扑灭了家畜口蹄疫。我国主要采用给易感动物接种口蹄疫灭活疫 苗的方法提高动物对口蹄疫病毒的抵抗力。 人类对口蹄疫疫苗的研究要开始于20世纪初【3】。12蹄疫疫苗包括传统疫苗和新型疫苗 两种类型。传统疫苗又包括弱毒苗和灭活苗。弱毒疫苗虽有价廉、成本低及免疫原性好和抗 体持续时间长等优点，但具有引起免疫动物病毒血症、长期带毒、排毒及病毒返强等缺点。 我国主要以免疫灭活疫苗为主要手段控制口蹄疫的爆发。但是就目前生产上的免疫情况来 看，口蹄疫疫苗免疫存在抗体合格率低，免疫持续时间短的缺点，效果不理想。因此，如何 采用有效手段提高口蹄疫疫苗的免疫效果以有效控制口蹄疫的爆发是当前畜牧业生产亟待 解决的～个重要问题。 前期研究表明，人参皂甙可以作为佐剂提高猪细小病毒疫苗、猪丹毒疫苗和奶牛乳房炎 疫苗的免疫效果【4，5，6，7】。但是人参皂甙具有价格高，难以在畜牧业生产上推广应用的缺点。 为此，我们从一种廉价的中药木鳖子中提取有效部位(ECMS)，将ECMS和商品口蹄疫疫 苗混合免疫实验动物，奶牛和猪，发现ECMS具有良好的佐剂作用。现将初步结果报告如下。 材料和方法 (一)中药木鳖子提取物(ECMS) 将中药木鳖子粉碎，用乙醇回流提取，减压浓缩，乙醚萃取以除去脂溶性成分等步骤， 得淡黄色木鳖子提取物粉末(ECMS)。 (二)ECMS对口蹄疫疫苗诱导豚鼠体液免疫反应的影响 将雄性豚鼠35只(体重220±lOg)随机分成7组，每组5只。每组动物肌肉注射牛口 蹄疫AsiaI．0型双价灭活疫苗(内蒙古生物药品厂)或者口蹄疫疫苗和佐剂的混合物，每只 豚鼠免疫2次，间隔时间为3周，每次注射剂量如表l所示： 本研究为浙江省科技厅资助项目。’通讯作者。 电话：057186971852： 电子邮箱：songhua@ziu．edu．cn。 86 表1每只豚鼠一次注射口蹄疫疫苗和佐剂的剂量 二免后3周采血，分离血清，一20℃保存待用。血清在检测前经56。C水浴30分钟。按 照说明书，采用正向间接血凝试验试剂(中国农业科学院兰州兽医研究所生产)检测血清口 蹄疫抗体。 (三)ECMS对口蹄疫疫苗诱导奶牛体液免疫反应的影响 1．不同剂量ECMS对口蹄疫疫苗诱导奶牛体液免疫反应的影响 黑白花青年奶牛24头’随机分为4组，每组6头。每组动物颈部肌肉注射牛口蹄疫 Asial．O型双价灭活疫苗(内蒙古生物药品厂)或者口蹄疫疫苗和佐剂的混合物，每头奶牛 免疫2次，间隔时间为2个月，每次注射剂量如表2所示： 表2每头奶牛一次注射口蹄疫疫苗和佐剂的剂量 首免前和首免后1个月，以及二免后1个月采血，分离血清，一20℃保存。血清在检测 前经56C水浴30分钟。按照说明书，采用正向间接血凝试验试剂(中国农业科学院兰州兽 医研究所生产)检测血清口蹄疫抗体。 2．ECMS对不同剂量口蹄疫疫苗诱导奶牛体液免疫反应的影响 黑白花奶牛24头，随机分为3组，每组8头。每组动物颈部肌肉注射牛口蹄疫AsiaI．