舌鳞状细胞癌高转移潜能细胞系的建立及生物学特性分析.pdf

摘要 舌鳞状细胞癌高转移潜能细胞系 的建立及其生物学特性的研究 摘 要 目的：通过体内连续传代的方法，从Tca8113细胞系中筛选 高结转移潜能亚系并对其生物学特性、淋巴结转移动物模 型的建立等方面进行研究。 方法： 1．在裸鼠后肢足垫接种Tca8113细胞，筛选胭窝淋巴结 转移灶，在体内扩增后进行体外培养。反复进行3个循环 后，获得Tca8113高转移潜能细胞并建系。将该细胞系细胞 接种于裸鼠后肢足垫和舌体建立胭窝淋巴结转移模型和颌 下淋巴结转移模型，观察并测算淋巴结转移率。 2．通过相差显微镜、微分干涉显微镜，HE染色、透射 电镜、扫描电镜，免疫组化染色和免疫荧光染色等方法， 观察该细胞系细胞形态及鉴定其组织来源；采用MTT法绘 制细胞生长曲线并计算群体倍增时间；计算细胞平板克隆 形成率。采用流式细胞仪检测细胞周期；分析该细胞系细 胞的染色体条数，研究其染色体倍性。 3．通过迁徙力与侵袭力实验研究该细胞系细胞的迁徙及 侵袭能力，并与Tca8113细胞对比；通过免疫荧光染色对该 表达谱基因芯片对两者的差异表达基因进行筛选。 结果： l 1．从Tca813细胞系内筛选出高转移潜能细胞亚系 Tca8l 13M。该细胞系体外可稳定生长，目前培养至82代。 Tca8113M细胞接种与裸鼠后肢足垫或舌部6周后，可分别 有80％并n75％的动物出现胭窝或颌下淋巴结转移；接种后 肢足垫10周后，还可有2／4的动物出现肺部及胭窝淋巴结 的双路转移。 EMA免疫组化和免疫荧光染色均为阳性。细胞群体倍增时 间为33．2小时。克隆形成率为63．7％。细胞周期检测示： G1／GO期67．23％，G2／M期11．49％，S期21．28％。染色体 众数为58条。 表达存在差异。其中432和807条基因在两种细胞内均有 1 表达，并且在Tea813M中表达较Tca8113上调两倍以上和 下调两倍以上。 结论；本研究从Tca8113细胞系中成功筛选出了具有高转移 潜能的细胞亚系Tea8113M并对其生物学特性进行了检测。 113M 该细胞系细胞可在体外稳定生长并传代。建立了Tca8 13M细 淋巴结转移、淋巴结肺部双路转移动物模型。Tca81 1 胞的体外侵袭力比Tca813细胞更强；两者之间的基因表达 谱间存在明显的差异。 关键词：舌鳞状细胞癌，淋巴结，肺，转移，动物模型 摘要 ToNGUESCCCELLLINE THEESTABLISHMENTOF AND WITHⅢGHMETASl[ASISPOTENTIAL IDENTInCATIoNoFITSBIoLoGICALCHARACTERS ABSTRACT 【Purpose】 has To celllinefromTea8113celllinewhich selecta metastasis poor high potential ofthecellline．Toestablish metastasis andto characters