总RNA提取定量和RT-PCR__20111226.pptVIP

操作步骤 采用TaKaRa PrimeScript RT reagent kit进行cDNA第一链合成： 按下列组分配制RT反应液 5X PrimeScrip Buffer 2.0μl PrimeScript RT Enzyme Mix 0.5 μl Oligo dT Primer (50 μ M) 0.5 μl Random 6mers (100 μ M) 0.5 μl Total RNA 6.5 μl 总体积 10?l 反转录反应条件如下 37℃ 15min （反转录反应） 85℃ 5sec （反转录酶失活反应） 注：反转录步骤在PCR仪中进行 Random 6 mers为随机的6核苷酸引物，引物序列为5-(P)NNNNNN-3，其5端和3端均含有-OH，因此可往两端延伸，特点是产物量大，特异性差，适用于长的或具有Hairpin构造的RNA。包括rRNA、mRNA、tRNA等在内的所有RNA的反转录反应都可使用本引物。 Oligo dT Primer