谷胱甘肽过氧化物酶模拟物——环己胺代硒桥联环糊精的合成及催化作用.pdfVIP

吉林省第三届科学技术学术年会89l 谷胱甘肽过氧化物酶模拟物——环己胺代硒桥 联环糊精的合成及催化作用 吕绍武 郭灿辉 陈 华 柳 淞 王小光 牟 颖 阎岗林 罗贵民 (吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室长春 130023) 摘要：基于天然GPX结构与功能的关系，利用化学和生物学的方法和原理，以8-环糊精为原料合 Wilson辅酶偶联法以及苯硫酚法，测定7 物浓度的双倒数作图呈平行线，表职人工模拟酶的催化机制为乒乓机制，反应动力学方程与天然酶类似， 表明人工模拟酶遵循天然酶的催化机制。 关键词：GPX人工模拟酶 胺代硒桥联环糊精 人工模拟GPX不仅能阐明酶的催化机理。而且具有重大的实际应用价值。谷胱甘肽过氧化物酶 1 111 (GPX，EC 9)属抗氧化应激酶系，它以还原型谷胱甘肽为底物，催化还原氢过氧化物，能消除体内的 自由基，防止脂质过氧化，对治疗和预防克山病、心血管病、炎症及癌症等有明显效果…。由于天然GPX的 来源有限，又不易用基因重组法获得，在溶液中不稳定，生产成本高，作为药用蛋白易被蛋白酶水解，故人 们把注意力集中在对GPX的人工模拟上“1。如何通过化学和生物学的方法产生高催化效率的GPX人工 酶已经成为对科学家的巨大挑战。目前，人们已合成出许多GPX模拟物，其中著名的小分子GPX模拟物 物“I。但是，这些模拟物活力普遍不高，绝大多数不溶于水且有毒副作用。基于天然GPX功能与结构的关 系，我们利用环糊精作为酶模型，将GPX的催化基团硒巯基引入环糊精，获得了一系列GPX小分子含硒 模拟物I7．91。为了进一步探索硒巯基的催化作用我们在原来环糊精模型的基础上，合成了在硒附近含有碱 性氨基／亚氨基的含硒GPX模拟物。使得硒醇将被二级氨基稳定并活化，其硒附近的氨基氮将通过N+ H…S,-分子内氢键将硒醇活化成在动力学上更有活性的硒醇阴离子I”·…。从而增加反应的K。，进而增强 酶活力。 1 试验部分 1．1．试剂与仪器 购白天津化工厂；苯硫酚购自上海试剂厂；硼氢化钠(NaBH-，AR级)、谷胱甘肽还原酶、还原型辅酶Ⅱ Bioteeh公司；其他均为国产 G25购白瑞典Pharmacia 均为Sigma产品；DEAE．52购自Whatman；Sephadex 分析纯试剂。 240-DS CHRIST IFS．1盯66V真空型付立叶变换红外光谱仪；Perkin—Elmer ALPHAL．2冻干机；Bruker 892 振兴吉林老工业基地——科技工作者的历史责任 元素分析仪；Varian MKII UV Unity一400核磁共振仪；ESCALAB 3100型紫外 X·ray光电子能谱仪；Shimadu 分析仪；上海红叶旋转蒸发仪。 1 2模拟物的合成 1 2．1 6A，6B一帽连一B—CD的合成 参见文献”…，二碘代B，CD的合成参见文献““，硒氢化钠的制备参见文献”“。 1．2．2 6A，6B．环己胺一6A’，6B’一硒桥联．p．CD的合成 mM mL的50 min以排除 二碘代0一cD(100 7．0的磷酸缓冲液。反应混合液通氮气20 mg)溶于3 pH 氧气，密闭。反应液中加入稍过量的环己胺，60℃反应3h，然后用注射器加入100NaFISe溶液，在氮气