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医学免疫学实验（一） 【实验目的】 　　1．了解凝集反应的原理、基本类型及其临床意义。 　　2．掌握玻片凝集实验、间接凝集实验的实验方法和结果分析。 直接凝集反应（试管法）— 溶血素效价的测定 直接凝集反应（玻片法) — 血型鉴定 间接凝集反应 — RF因子的乳胶凝集实验（示教） 实验一、直接凝集反应（试管法）— 溶血素效价的测定 一、原理 凝集反应是指细菌、细胞等颗粒性抗原或表面包被抗原的颗粒状物质在电解质存在的条件下与相应抗体结合，出现的肉眼可见的凝集块的现象。 凝集反应是一种定性或者半定量的检测方法。常用来检测抗体的滴度和效价。 SRBC + 抗SRBC抗体 凝集颗粒 （溶血素） 二、材料 1、1：50溶血素、NS、1%SRBC溶液 2、小试管、吸管、橡胶乳头、多孔反应板、 37度恒温箱 三、操作方法 1、取多孔反应板一块，8孔内按下表加入试剂。 2、碰匀，置37℃温箱1.5h后，取出观察结果。 四、结果（观察结果注意：勿振摇） - 不凝集 + 小部分凝集，孔底小量凝集 ++ 部分凝集，孔底部分凝集 +++ 大部分凝集，凝块非全部下沉于管底而是稍有铺开 ++++ 完全凝集，孔底有边缘卷曲的粉色膜状凝集块 五、结论 效价 —— 指抗原抗体反应时，到达反应终点时，出现明显凝集反应的最高血清稀释度。 六、讨论 实验二、直接凝集反应（玻片法) — 血型鉴定 玻片凝集试验为定性试验，一般用已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒抗原，如菌液或红细胞抗原各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便，快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。 一、原理 　 将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。 　　　　　　 ABO血型的划分 二、材料 1. NS、标准抗A和抗B单克隆抗体 2. 玻片、刺血针、小试管、吸管、酒精棉球等 1．取洁净载玻片1块，并标记（如图） 2．采血。（用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。收入小试管，用吸管各取适量分别加在载玻片的两端。） 3．将抗A、B试剂分别加1滴与玻片上两侧的血液混匀。 4．观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成细沙样；无凝集，红细胞呈均匀分散。判定结果后把玻片放入消毒缸中。 间接凝集反应（示教） 　　将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。 　　根据载体的不同可将间接凝集反应分为：间接血细胞凝集试验、间接乳胶凝集试验（及间接乳胶凝集抑制试验）和金黄色葡萄球菌协同凝集试验等。 测定RF因子的乳胶凝集实验 【实验原理】 　　可溶性抗原致敏的乳胶颗粒与相应抗体作用可使乳胶颗粒凝集，此为间接乳胶凝集试验。 　　类风湿性患者血清中含有RF因子。将异常IgG吸附在乳胶颗粒表面，与待测血清混合，如出现白色细沙样凝集，则为阳性反应，说明血清中含有RF因子（抗异常IgG抗体），无凝集则为阴性。 * * RPR NS 37℃，1.5h 0.2 1:400 0.2 0.2 3 0.2 1:800 0.2 0.2 4 注意事项：1、NS和溶血素用同一支吸管，但加SRBC要换另一支洁净吸管。 2、溶血素用量只有0.2ml。（1孔加0.2ml后，以后各孔均倍倍稀释） 3、要反向添加SRBC,且吸管的尖端不要触及液面。 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 1%SRBC(ml） 1:6400 — 1:3200 1:1600 1:200 1:100 稀释度 0.2 弃去 0.2 0.2 0.2 0.2 溶血素 (ml) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 NS (ml) 7 8 6 5 2 1 孔号 对照 抗A、抗B —、— O型 —、— A、B AB型 抗A B B型 抗B A A型 血清中Ab 红细胞表面Ag 三、操作方法 　　 A B