中山大学网络教育资源建设.创新.pptVIP

《医学遗传学》网络课程 主讲人：郭奕斌 中山医学院医学遗传学教研室 第十一章、遗传病的诊断 第五节、基因诊断 五、基因诊断的应用 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 一 核酸分子杂交技术 （一）基因探针 1. 概念：一段与目的基因或DNA互补的特异性核苷酸序列。 2. 种类：①基因组DNA探针；②cDNA探针；③RNA探针；④特异性寡核苷酸探针。 3. 制备方法： ⑴基因组探针：基因组文库→筛选目的片段→克隆扩增 ⑵?cDNA探针：分离纯化相应的mRNA→逆转录→cDNA； * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * ⑶?寡核苷酸探针的制备：人工合成十几个到几十个核苷酸片段。 4、标记材料： ⑴ 同位素：32P标记核苷酸的α磷酸基； ⑵ 非同位素：生物素、地高辛。 5、标记方法： ⑴ 缺口平移法（nick translation）:DNA酶I切口，DNA聚合酶酶切和聚合； ⑵ 随机引物标记法:6个核苷酸的随机DNA片段作为引物； * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 缺口平移标记法 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * ⑶特异引物法：PCR标记特异探针，并扩增该片段。 ⑷末端标记法。 (二)DNA的变性与复性及核酸分子杂交： 在加热、强碱等条件下，DNA双链解开成两条单链，称为DN