工业微生物菌种的扩大培养..pptVIP

第六章 工业种子的扩大培养 讲授内容： 第一节 概述 第二节 种子制备的过程 第三节 种子质量的控制 【教学目的与要求】了解种子制备过程中的相关术语、掌握各种种子制备的方法及影响种子质量的因素和控制。 【教学重点与难点】种子制备的方法及影响种子质量的因素和控制。 思考题： 1、简述种子制备的工艺流程 2、怎样确定种子罐的级数？ 3、作为种子应具备那些条件？ 4、简述影响种子质量的因素及控制。 5、概念：接种量、种子制备、种子罐的级数、发酵罐的级数、种龄、孢子制备。 6、种子异常情况分析。 第一节 概述 定义：由保藏的菌种开始，经过逐级扩大培养后，最后获得供生产车间生产的，足够数量和优质质量的纯种。纯种培养物称为种子。种子的扩大培养过程又称种子制备。 菌种扩大培养的目的： 1.提供大量而新鲜的、具有较高活力的菌种； 目的就是：a、缩短发酵周期，降低能耗、减少染菌的机会（空气过滤设备有效时间是有限的） b、为了使培养菌在数量上取得绝对的优势，抑制杂菌的生长。 2.让菌种从固试管、液体试管……，逐步适应； 如：啤酒酵母 3.菌种经过扩大培养，可以提高生产的成功率，减少“倒罐”现象。 作为种子必备的条件： 1.生命旺盛有活力，移种后，能迅速生长，缩短延滞期。 2.菌体总量适宜，保证发酵罐的接种量。 3.遗传表现性要稳定； 4.菌种要纯。无杂菌污染。 5. 保持稳定的生产能力。 概念： 种子罐的级数：种子在种子罐中扩大培养的次数。 发酵罐的级数：种子罐数加一。 接种量：是指移入的种子液体体积和接种后培养液体积的比例。 或移入的种子液体积占接种前培养液体积的百分数。 种龄：生产种子时的培养时间。 孢子制备：用固体培养的种子叫孢子制备。 种子制备：用液体培养的种子叫种子制备。 第二节 种子制备的过程 一.种子制备的一般流程 二.孢子的制备 三.种子的制备 一、种子制备的一般流程 确定流程的原则： 1、保证发酵罐的菌种量； 2、尽量缩短流程、以防治染菌。 考虑因素： 1、发酵罐的体积 2、菌种的特性 3、工艺上菌种量的要求 扩大培养的方法 通常有两种方法： 固体法：用于酿造业（酱油、白酒等），也是源于酿造业， 有霉菌的纯培养，也有混合培养如：大曲 液体法：液体深层培养，适合于众多发酵行业 液体培养为主导方式。 随着生物工程与技术的发展，许多传统的应用微生物工业的菌种已形成了产业化。例如：酒精的生产 原生产工艺流程为：…… 以酵母为线条的生产工艺为： 以霉菌为线条的生产工艺为： 现在：（1）酵母使用粉末酵母 鲜压榨酵母 固定化酵母细胞 （2）霉菌则由各种液化、糖化酶取代 二、固体培养孢子制备 （一）斜面孢子的制备 （二）米粒孢子 （三）种曲 （一）斜面孢子的制备 在试管或扁瓶（茄子瓶）内，以琼脂固化的培养基表面生长的菌种培养物。 （二）米粒孢子（米孢子） 米孢子：霉菌的孢子培养，接种到灭菌后的大米或小米颗粒上，恒温培养一段时间后所产生的孢子。 优点：⑴保存期较长，可用半年以上。 ⑵孢子量大，107-108个孢子/g米粒。 质量标准： 1.无杂菌污染，每500瓶抽样检查1-2瓶； 2.足够孢子数，发芽率80%； 3.生产能力高； 4.真空干燥后含水率小于8%； （三）种曲 培养材料用麸皮、米糠、稻壳等 柠檬酸、酱油、醋 放线菌孢子的制备：琼脂斜面培养基，碳源和氮源不要太丰富，干燥和限制营养可诱发孢子形成。培养温度28 ℃，少数37 ℃；培养时间5-14天。 霉菌孢子的制备：一般采用米孢子或种曲，培养温度25 ℃-28 ℃，培养时间4-14天。 细菌孢子的制备：琼脂斜面培养基，碳源限量氮源丰富配方，牛肉膏、蛋白胨。温度37 ℃，少数28 ℃；培养时间一般1-2天，产芽孢的细菌5-10天。 三、种子的制备 （一）摇瓶种子制备 （二）种子罐的种子培养 种子制备:将固体培养的孢子或菌丝转到液体培养基中培养，使其产生大量的菌丝或菌体的过程。 （一）摇瓶种子制备 1、摇瓶种子： 将斜面种子、米孢子、种曲接种于锥形瓶内液体培养基中，摇床上震荡培养得