反相离子对高效液相色谱法测定SD大鼠血浆中河豚毒素的含量.pdfVIP

维普资讯 第36卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究报告 第5期 2008年 5月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 588—592 反相离子对高效液相色谱法测定 SD大鼠血浆 中河豚毒素的含量 郑雍怡 王 彦 张 计 王刃锋 阎超 (上海交通大学药学院，上海 200240) (中国科学院大连化学物理研究所，大连 116023) 摘 要 建立了大鼠血浆中河豚毒素 (ITx)反相离子对高效液相色谱测定方法。血浆样品加水涡漩 ，再加沉 淀剂 (乙腈)：V(含0．5％HAe的甲醇液)：3：1)，旋涡离心后取上清液进样测定。色谱柱为AgilentZorbax sBC。柱 (150lnln×4．6mm×5 m)；流动相为 10％ACN-90％的8mmol／L庚烷磺酸钠与0．005％TFA混合溶 液，配好后调到pH5．0；紫外检测波长 196nm；流速 1．0mL／min；柱温为室温。本方法 ITx标准品检出限为 1．055mg／L，血浆中133(的检出限为0．1055mg／L。血浆中 ITx的线性范围为21．1～211mg／L，r=0．9989。 日内和 日间精密度 RSD均小于3％。本方该法准确、专属性强，适用于血浆中 ITx的浓度测定。 关键词 反相离子对高效液相色谱法，河豚毒素，血浆 1 引 言 河豚毒素(tetrodotoxin，yix)是存在于豚鱼类体内和多种脊椎动物及无脊椎动物体 内的一种剧毒 生物碱，是毒性最强的非蛋 白类神经毒素之一。33X是通过与钠离子通道受体结合，阻断电压依赖性钠 通道 ，从而阻滞动作 电位，阻止神经肌肉兴奋的产生，导致与之相关的生理活动障碍。主要是神经肌肉 麻痹，甚至引起死亡…。每年我国每年都有十几人因误食河豚中毒身亡的事件发生。因此，寻找一种 准确可行的33X血浆浓度检测方法有重要的现实意义。 33X的定量测定方法有小 鼠生物法 ¨2]，免疫学测定法 J、液一质联用法 j、直接紫外检测法 以及 碱衍生化后荧光检测器检测 等，这些方法绝大多数是对水产品(大多为河豚鱼)中河豚毒素的含量进 行检测。由于1_Ix难溶于水，又不溶于任何有机溶剂，只溶于稀酸，使1_Ix很难与血浆样品中的内源性 物质相分离，造成其血浆样品很难分析，目前国内外关于血浆 中11 定量检测的方法还非常少。 本研究建立了一种酸性的双有机沉淀剂提取TIX血浆样品的新方法，并以庚烷磺酸钠作为离子对 试剂，应用反相离子对高效液相色谱一紫外检测 (RP—IP—HPLC—uv)法对血浆 中TIX进行分析。本方法 能很好地将 TIX从血浆样品中提取出来，并能很好地与血浆 中的内源性物质相分离，可以实现定量检 测 ，且方法准确，专属性强 ，重现性好。 2 实验部分 2．1 仪器与试药 LC-20AB高效液相色谱仪，包括LC-20AB泵、SPD-20A检测器、LCsolution工作站和DGU-20A3脱气 仪(13本岛津公司)；5417R超速低温离心机 (德 国Eppendorf公司)；DU800型核酸蛋 白分析仪 (美 国 Becman公司)。 11 标准品由南宁枫叶药业有限公司提供 (纯度为99．0％)；乙腈(ACN，Tedia，USA)，色谱纯；庚 烷磺酸钠(Across，比利时)；三氟乙酸(TFA，Across，比利时)；分析纯 乙酸 (国药集团化学试剂有限公 司)；去离子水 (MilliporeQ，USA)。 2．2 色谱条件 色谱柱：AgilentZorbaxSBC18柱(150mm×4．6mln×5ixm)；AgilentC18预柱；检测波长：196nm；柱 温：室温；流速 ：1．0mL／min；流动相 ：10％ACN一90％的8mmol／L庚烷磺酸钠与 0．005％耵1A混合溶液， 流动相用 NaOH调到至 pH5．0。 2007-09-07收稿；2007—10-30接受 } E—nlai~-．chaoyan@ unim ／cmtech．coin 维普资讯 第5期 郑雍怡等：反相离子对高效液相色谱法测定大鼠血浆中河豚毒素的含量