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维普资讯 第 7期 高 分 子 学 报 No．7 2008年 7月 ACTA POLYMERICA SINICA Ju1．，2008 含氨基和环氧基双功能基的聚合物刷磁性微球 的制备及 对青霉素 G酰化酶的固定化 李秀涛 黄军生 张 勇 郭 淼 阎虎生一 (功能高分子材料教育部重点实验室 南斤大学高分子化学研究所 天津 300071) 摘 要 在 内部分散超顺磁性 Feod纳米粒子 的二乙烯苯交联聚丙烯酸微球表面 引入原子转移 自由基 聚合 (ATRP)引发剂 ，弓l发 聚合 向微球 表 面分 别 引 入 P(GMMA—r—DMAEMA—r—GMA)、P(GMMA—r—DMAEMA)和 P(GMMA—r—GMA)无规共聚物刷(GMMA为甲基丙烯酸甘油单酯 ，DMAEMA为 甲基丙烯酸一Ⅳ，Ⅳ一二 甲氨基乙酯 ， GMA为甲基丙烯酸缩水甘油酯)，聚合物刷 中GMMA链节的作用是使 聚合物刷具有亲水性 ，DMAEMA引入氨 基 ，GMA引入环氧基 ．研究 了青霉素 G酰化酶在这些载体上 的固定化和其酶活性 ，结果表明，同时引入环氧基 和氨基的P(GMMA—r—DMAEMA—r—GMA)刷磁性微球固定化青霉素G酰化酶的活性和活性收率都最高，其固定 化动力学 比只含环氧基 P(GMMA—r—GMA)刷磁性微球的好 ．固定化酶 比自由酶更耐热，固定化酶的最佳 pH值 比自由酶的略高，固定化酶重复使用 10次后其活性保留70％． 关键词 酶固定化 ，磁性微球 ，聚合物刷 ，青霉素 G酰化酶 超顺磁性粒子材料广泛应用于药物控释 、免 是固载速度较慢 ，易造成蛋 白质 的活性 (如酶活 疫试验 、磁共振成像 、肿瘤热疗 、医疗诊断、酶固定 性)的失活 ．本文制备 了在聚合物刷 中同时含有环 化以及生物分离 (如蛋白质 、DNA、细胞 、病毒和细 氧基和氨基 的磁性微球 ，蛋 白质 (用青霉素 G酰 菌的分离)等方面 “．磁性纳米粒子 由于尺寸 化酶作为模型)首先通过其羧基与微球上 的氨基 小 ，可以很容易通过血液循环系统被传输到 目标 的离子作用使蛋 白质快速结合于载体上 ，已通过 组织 ，同时又有很高 的比表面积，应用于药物控 离子作用固载的蛋 白质通过其氨基 、巯基与载体 释 、作为磁共振成像对 比度增强剂和热疗等体 内 上的环氧基作用使其共价 固载，既有离子作用固 应用方面．磁性纳米粒子的缺点是 ，通过外磁场捕 载的快速固载的优点，又保持 了共价 固载 的固载 集磁性纳米粒子需要特殊 的强磁场仪器 ．磁性 牢固、不易流失 的优点 ． 微球 (0．1～5 m)则凭借着其通过磁场 与体系快 1 实验部分 速分离 、磁场强度要求低 、所用产生磁场 的设备简 单等优 势在体 外 的磁分离等应用方面深 受青 1．1 原料与试剂 睐 ．前文我们制备 了单分散交联聚丙烯酸微 甲基丙烯酸缩水甘油酯 (GMA，天津南开和成 球 ，并通过微球 内羧基络合 Fe 和 Fe 然后碱性 有限公司提供)，甲基丙烯酸一Ⅳ，Ⅳ一二甲氨基乙酯 共沉淀，得到微球 内分散超顺磁性 FeO 纳米粒 (DMAEMA，ACROS)，上述两单体用前要减压蒸馏 子的磁性微球 ．相对于磁性纳米粒子 ，磁性微球 脱阻聚剂 ；溴化亚铜 (CuBr，上海试剂一厂)，在冰 的缺点是其 比表面积较低 ，因而负载生物分子或 醋酸 中搅拌过夜后 ，先用冰醋酸洗涤数次，再用无 配体的容量低 ．为了克服这一缺点 ，我们在上述的 水乙醇洗至上清液无色，真空干燥备用 ；青霉素 G 交联聚