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组织工程尿道黏膜体外构建的实验研究 摘要 尿道缺损是泌尿外科临床常见的疾病，包括先天性尿道下裂、尿道上裂和各 种类型的尿道狭窄等。目前临床上常应用局部阴茎阴囊皮瓣、口腔粘膜上皮、膀 胱粘膜上皮、带蒂睾丸鞘膜等进行尿道上皮替代修复。然而长段的尿道缺损往往 由于自体修复材料有限，使其在临床外科重建中的应用受到限制而无法得到良 好的医治。组织工程技术的发展应用，可能最终解决泌尿系组织来源受限的问题， 将为泌尿系外科重建提供最佳的修复材料。 本实验应用儿童包皮表皮细胞作为种子细胞，以鼠尾胶原制成的胶原膜作为 支架材料，进行细胞一材料复合物的体外构建、培育，观察可否培育成尿道上皮 组织，希望为组织工程尿道从建提供最佳的替代修复材料。 目的： 探索人体包皮表皮细胞分离培养的最佳方法，为组织工程尿道重建提供种子 细胞；探索以包皮表皮细胞为种子细胞，以胶原膜为支架材料体外构建组织工程 尿道黏膜的可行性。 方法： 采用机械分离与酶消化法获得儿童包皮表皮细胞，以免疫组织化学方法进行 细胞鉴定。制备胶原膜作为支架材料，以HE染色、免疫组织化学和扫描电镜进 行评价。分离细胞经体外原代培养与传代扩增，将细胞接种于自制胶原膜上，体 外联合培养72d，通过对复合物的倒置显微镜、扫描电镜、眦染色及角蛋白的免 疫组织化学检测，了解细胞在支架材料上的生长情况。 结果： l、用胰蛋白酶和中性蛋白酶消化相结合的方法，可分离出较多的表皮细胞，且 成纤维细胞污染少。 2、经抗人角蛋白为一抗，免疫组织化学染色鉴定，进一步证实所分离的细胞为 表皮细胞。 3、以K_SFM作为培养基，细胞生长增殖良好，纯度高，无成纤维细胞污染。 4、胶原膜支架上的细胞经过体外培养后，细胞可较均匀的分布及吸附在膜表面， 并沿基膜排列形成复层样结构。扫描电镜显示细胞一材料复合良好，免疫组织化 学检测支架上的细胞广谱角蛋白表达阳性，证明上皮细胞分离培养的表皮细胞能 在胶原膜上生长。 结论： 该实验方法获取的包皮表皮细胞是构建组织工程尿道上皮的良好种子细胞， 能与胶原膜支架在体外复合，生长状况良好。运用该组织工程方法能够在体外进 行尿道黏膜上皮结构的初步构建，有望成为替代尿道黏膜的组织工程材料，为进 一步临床修复诸如尿道下裂、尿道狭窄等尿道缺损奠定技术基础。 关键词：组织工程；尿道上皮：重建 2 ofU№thraIMucosa inVitro by Experimentalstudy Construcing Ti蹒ue Engin∞ring l『】n酿b髓I￡lefIectisacommondi义a辩incIiIlical m甜lral始ictu托．岫I hyp0Spadias’印ispa妇，锄d硼曲邺嘲—略of pen枯and sb屺：a：nl is f．Or sc瞅um伯p，mo删电mucosa，bladd盱mucosa，testispediclereplaced in w池 砒eⅡl】融epithelial∞pair isoRenliⅡ血edto int：hc autolo星；叫s阳pair眦terial make嘶caI∞c0璐协lction cliIlical印plicalion，andc锄I烈get900d of mcliIIlil：od of