氢氘交换质谱技术及其在蛋白质相互作用研究中应用.pdfVIP

生物物理学报 2013年 11月 第29卷 第 11期：811-822 ACTA BIOPHYSICA SINICA Vo1．29 No．11 Nov．2013：811—822 WWW．qb．org．on 氢氘交换质谱技术及其在蛋白质 相互作用研究中的应用 陆海荣 ， 黄青山 ， 1．复旦大学生命科学院遗传学研究所，遗传工程国家重点实验室，上海 200433 2．上海高科联合生物技术研发有限公司，上海 201206 收稿 日期：2013．07—24；接受 日期：2013．11-04 通讯作者：黄青山，电话：(021E．mail：qshuang@fudan．edu．cn 摘要：氢氘交换质谱法 (hydrogen／deuterium exchangemassspectrometry，HD／X-MS)是一种研 究蛋 白质空间构象的新技术，蛋 白质主链氨基氢原子和重水溶液 (D20)中氚原子的交换过程可 用来研究蛋 白质空间结构。H，，DX．MS包括五个基本步骤 ：样 品氢氘交换反应、终止反应、样 品 酶解、质谱检测和数据分析。 目前，该技术 已被广泛应用于蛋 白质的结构、结构动态变化及蛋 白质相互作用等方面的研究．与经典 的X．射线蛋 白质结构研究方法形成互补 。文章介绍 了 H／DX．MS的基本原理和技术流程 ，并综述 了HD／X．MS在蛋 白质相互作用研究中的应用情况。 关键词：氢氘交换；质谱 ；蛋 白质相互作用 中图分类号：065 DoI：10．3724／SP-J．1260．2013．30108 引 言 早在上世纪50年代，Hvidt和 Linderstrom—Langt】就注意到蛋 白质中氢原子和重水溶液 (D：O)中氘原子的交换现象。此后 ，越来越 多的研究人员报道 了这种氢氘交换 (hydrogen／deuterium exchange，HD／X)现象2[ 。随着质谱 (massspectrometry，MS)技术的 发展，研究人员结合H／DX和MS方法形成一种研究蛋白质结构的新技术——氢氘交换质 谱法 (HD／X—MS)。该技术 自1991年第一次应用6[]以来，已广泛用于蛋白质的结构和结构动 态变化方面的研究，涉及蛋白质的折叠过程7【~“】、蛋白质与配体结合后的结构变化 【～51、蛋 白质分子间的相互作用界面[16~241、由多个亚基组成的蛋 白多聚体 (包括病毒衣壳蛋白)的空 间构象2[5~31]、蛋白质分子中结构域之间的相互作用界面[32,33】、蛋白质与小分子配体相互作 用]34-38]、蛋 白质与DNA相互作用[39~42]、蛋白质与膜的相互作用3[8,43]、翻译后修饰 f糖基化、 磷酸化和谷胱甘肽化1，以及点突变对蛋白质结构的影响[4450]等。H／DX．MS技术已经成为结 构生物学中一个非常重要的研究方法5[1~59]，与经典的x．射线蛋 白质结构研究方法相 比， H／DX．MS具有 以下优势：1)蛋白质在溶液中处于天然状态；2)可分析蛋白质动态变化过 程；3)质谱检测灵敏度高，蛋白质样品用量少 (微克级)；4)质谱分析速度快，极大缩短实 验周期；5)质谱设备非常普遍，降低了实验门槛 。本文将介绍H／DX-MS的基本原理和技 811 术 流 程 ， 以及 应 用 H ／D X — M S 研 究 蛋 白质 分 子 间相 互 作 用 、 蛋 白复合 体 结 构 方 面 的研 究 进 展 。 H ／D X ． M S 的基 本 原理 当蛋 白质 用 重 水 溶液稀释 后 ， 蛋 白质分子 中不稳 定 的氢 原 子和 重 水 溶液 中的氘 原子 进 行交换 。 不 稳 定氢 原子 主 要 包 括 蛋 白质 分 子 中与支链上 氮 、 氧 、 硫 相连 的氢 原子 ， 以及 主 酰 胺 键 基 的氢 原子 图 1 。 那 些 和 碳 原子 相 连 的氢 原 子 则 不 会 发 生氢 氘 交换 。