原油降解菌的筛选、鉴定及其表面活性代谢产物的分析.pdfVIP

原油降解菌的筛选、鉴定 及其表面活性代谢产物的分析1 郝冬辉，林建群，沈红，林建强，曲音波 山东大学微生物技术国家重点实验室（250100 ） E-mail：jianqunlin@ ，jianqianglin@ 摘 要：从来自油田的样品中分离筛选到一批能在兼性厌氧条件下以石油为唯一碳源生长的 细菌，并从中得到一株降油降蜡效果最好的 SH6 菌株。通过菌体形态、生理生化特征以及 16SrDNA 序列分析，鉴定该菌为铜绿假单胞菌。该菌可以产生生物表面活性剂，生长于以 原油或石蜡为唯一碳源的培养基质后可以使液体表面张力降低43 % 以上。对该生物表面活 性剂进行定性、定量分析发现是鼠李糖脂；在以甘油为唯一碳源时，在指数生长期末期和平 衡生长期产生大量的鼠李糖脂，最高产量达3.547 g/L。 关键词：微生物采油, 铜绿假单胞菌，鼠李糖脂,生物表面活性剂 1．引言 目前常规采油技术只能开采出地下石油储量的30%～40%，提高石油采收率意义重大。 微生物提高石油采收率(Microbial Enhanced Oil Recovery Technology简称MEOR)技术是利用 微生物具有分解碳氢化合物的性能或者利用微生物的代谢产物，如各种气体、有机酸类、分 解酶类、以及生物表面活性剂来增加油层压力和渗透性，降低表面张力和油水界面张力，促 [1] 进原油的乳化，降低原油粘度，从而提高原油采收率 。MEOR是目前开采油藏中剩余油和 枯竭油藏最好的廉价的采油方法，与其他采油技术相比，具有工艺简单﹑经济效益好﹑环境 友好和适用范围广等特点。 MEOR 的关键是选育高效采油菌株。本文从油田样品中分离筛选到一株可以在兼性厌氧 条件下降解石油和石蜡，产生生物表面活性物质，对石油有良好乳化效果的细菌，对该菌进 行了菌种鉴定，并对菌种性能进行了研究。 2 ．材料与方法 2.1 样品来源 用于菌株分离的样品来源于胜利油田长期被原油污染的土壤及含油废水。 2.2 培养基 无机盐溶液 （g / L ）：K HPO 0.5，(NH ) SO 0. 1，MgSO 0.025，NaNO 0.2 。葡萄 2 4 4 2 4 4 3 糖培养基：无机盐溶液中添加酵母膏 0.2 % ，葡萄糖 2 %，pH 7.0-7.2 。原油培养基：无机盐 溶液中加原油 2 % （质量比），pH 7.5 。固体石蜡培养基：无机盐溶液中加固体石蜡 2 %， pH 7.0-7.2 。 产脂培养基 （g / L ）：NaNO 2.5 ，K HPO 4.0, KH PO 4.0 ，CaCl ⋅2H O 0.1， 3 2 4 2 4 2 2 MgSO4 0.2 ，NaCl 1 .0，KCl 1.0，酵母粉 1.0，甘油 3 %，蒸馏水定容，pH 6. 5 。 2.3 研究方法 2.3.1 兼性厌氧原油降解菌的分离筛选方法 将油水样和土样用无菌水适当稀释后，分别接 入装有葡萄糖培养基的厌氧培养瓶中，40 ℃，200 r/min 摇床培养 7 d 。将富集的菌液以一 定稀释度涂布于原油为唯一碳源的无机盐固体平板上，37 ℃厌氧培养 5~7 d 。从原油平板中 1 本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（项目编号：20040422062 ）的资助。 - 1 - 的降油斑上挑取菌落，好氧条件下在 LB 平板上反复划线分离单菌落。最后各单菌落再在以 原油为唯一碳源的固体培养基上划线，37 ℃培养 5~7 d，选取降油斑较大的菌株扩培并保存 菌种。 2.3