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唾液淀粉酶最适pH值摘要：目的掌握测量pH对酶活力影响的基本原理和方法，前言：目的。实验原理：仪器材料和试剂药品：仪器材料：37 C恒温水浴箱，分光光度计，。 试剂药品： 淀粉溶液. 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液 碘液实验1、 缓冲液的配置：根据下表，配置各个pH值的缓冲溶液各10ml 表1 用量（ml） 1 2 3 4 5 PH 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 0.2mol/L NaHPO4 0.62 0.93 1.33 1.88 2.45 0.2mol/L NaH2PO4 4.38 4.07 3.67 3.12 2.55 蒸馏水 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 编号 6 7 8 9 10 PH 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 0.2mol/L NaHPO4 3.05 3.60 4.05 4.35 4.58 0.2mol/L NaH2PO4 1.95 1.40 0.95 0.65 0.42 蒸馏水 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 2、唾液的获取：[]a.吐取法：蒸馏水漱口,然后用舌尖抵住上额或下额齿根后,微低头.轻启双唇，将下嘴唇搁在烧杯边缘，让唾液自然流入试管中.蒸馏水漱口蒸馏水唾液的稀释：取支试管，分别编上号～用量（ml） 1 2 3 4 5 6 7 8 唾液 1．00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 蒸馏水 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 4、唾液稀释倍数的选取另取支试管，分别编上～号，各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号的试管里，向支试管内同时加入1ml的0.02％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37 C恒温5分钟后取出，滴加～碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数。） 1 2 3 4 空白 PH7.0缓冲液 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 (2.5g/L) 0.1 0.2 0.3 0.4 E(最适稀释倍数) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 37°C 水浴，7.5min 碘液（滴） 1 1 1 1 1 蒸馏水 5 5 5 5 5 颜色 蓝色 蓝色 蓝色 蓝色 蓝色 根据颜色适中判断，可以得出最适的淀粉底物用量为0.3ml。6、测量pH： 取1支试管，分别标上号1～1，按下表操作4、唾液稀释倍数的选取） 1 2 3 4 5 0.02％淀粉溶液 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 2ml缓冲溶液pH 6 6.2 6.4 6.6 6.8 (保温10min) 37 摄氏度 稀释唾液 1 1 1 1 1 管 号 6 7 8 9 10 0.02％淀粉溶液 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 2ml缓冲溶液pH 7 7.2 7.4 7.6 7.8 (保温10min) 37 摄氏度 稀释唾液 1 1 1 1 1 以蒸馏水调零，用分光光度计测出各试管中溶液的吸光度A值，做好记录。 PH值 6 6.2 6.4 6.6 6.8 A660 0.032 0.054 0.069 0.084 0.019 PH值 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 A660 0.208 0.043 0.05 0.101 0.214 以pH值为横坐标，吸光度A为纵坐标，在坐标纸上作出平滑曲线，取曲线最低点对应的pH值，即为唾液淀粉酶的最适pH值。 实验结论：根据实验数据做出的平滑曲线图可知，结果测得pH值在6.0～7.8范围内并且随着pH的增大先减小后增大，pH＝6.8左右，吸光度值最低。最低点对应的pH=6.8即为唾液淀粉酶的最适pH值。 分析讨论： （1）此次实验是根据唾液淀粉酶催化底物水解量来测最适pH值，因此在唾液淀粉酶活性最高时要保证底物过量，淀粉分解的越多，A值就小； （2）滴加碘液测定唾液稀释倍数时，用吸量管吸取少量碘液沿管壁加入一滴即可，本次实验过程中，由于经验不足，加入碘液过多无法辨认颜色最适中的试管，导致重做。 （3）由实验可知：过酸过碱都会抑制酶的活性，使之淀粉的分解减少，A值增大； （4）最适PH不是酶的特征性常数，它受底物浓度、缓冲液种类与浓度以及酶纯度等因素的影响。溶液PH高于或低于最适PH时，酶活性降低，远离最适PH时还会导致酶变性。