乳铁蛋白抗菌肽制备及分离纯化.pdfVIP

摘要 摘要 乳铁蛋白是牛初乳中的一种生物活性蛋白，具有广谱抗菌、增强铁的传递与吸收、 免疫调节、抗病毒等作用，但是其热稳定性很差，限制了其应用范围。将其酶解不仅可 以提高抑菌活性，还可以增强热稳定性，这将拓宽它在食品、医药、饲料等行业的应用。 本课题对天然抗菌剂的开发具有重要意义。本论文主要研究了制备乳铁蛋白抗菌肽的酶 解工艺、脱盐工艺和分离纯化，并对此抗菌肽进行了抑菌性研究。 首先，研究了乳铁蛋白抗菌肽的酶解工艺。通过单因素试验，响应面回归分析得到 酶解的最佳工艺为：采用胃蛋自酶为酶源，乳铁蛋自浓度为30mg／mL，胃蛋白酶与乳 2．4，水解时间2h。优化条件下水解度为10．76％， 铁蛋白的质量比为1．5％，温度44℃，pH 抑菌率为97．97％。乳铁蛋白抗菌肽氨基酸组成分析显示，其中疏水性氨基酸占32．90％， 碱性氨基酸占19．15％。高效液相体积排阻分析发现，乳铁蛋白抗菌肽的相对分子质量 主要分布右。 其次，研究了DA20I．C大孔吸附树脂对乳铁蛋白抗菌肽静态及动态脱盐作用。通 过静态吸附实验，得到了吸附的动力学曲线及方程、吸附等温线和最佳洗脱剂。对于上 样浓度为10 OR2=0．9045)； mr／mE的乳铁蛋白抗菌肽，吸附速率方程为Y=0，5035X，0．3971 上样浓度为30 验结果表明：在采用85％乙醇为洗脱剂时，DA201．C大孔吸附树脂对乳铁蛋白抗菌肽的 脱盐率为97．40％，乳铁蛋白抗菌肽的回收率为92．54％。对乳铁蛋白抗菌肽的稳定性研 究发现，其具有较强的耐肠道酶消化稳定性；在酸性条件下，具有较强的热稳定性和贮 藏稳定性。 G．50分离得到了抗 最后，研究了乳铁蛋白抗菌肽的分离纯化。首先通过Sephadex 菌性更强的乳铁蛋白抗菌肽．b，该肽在lmg／mL时，对大肠杆菌的抑菌率为99．17％。 然后通过半制备RP．HPLC进～步分离得到的乳铁蛋白抗菌肽．b1，它在O．1rag／mE时对 大肠杆菌的抑菌率为99．05％。迸一步通过分析型RP．HPLC纯化，得到了乳铁蛋白抗菌 肽-b1．1，图谱显示为单一峰。在O．1mg／mL时对大肠杆菌的抑菌率为99．12％，其相对 分子质量为2500左右。研究结果还表明，该抗菌肽可以抑制包括革兰氏阴性菌、革兰 氏阳性菌等常见的食品腐败菌及致病菌，具有广谱抗菌性。 关键词：乳铁蛋白；乳铁蛋白抗菌肽；酶解；脱盐；分离纯化；抑菌性 Abstract a of Lactoferrinisabioactiveinthebovineeolostrum，、^，im protein varietybiological as antibacterial irontransferand functions，such broad·spectrum activity,reinforced its effectits functions．Butthermal absorption,antivirus stabilityseriously applications． poor After not Call the alsocan by inhibitoryactivity,but