人mig重组蛋的制备及其防治化疗骨髓毒副作用的研究.pdfVIP

人MIG重组蛋白的制备及其防治化疗骨链毒副作用的研究 摘要 本研究的目的是开发防治化疗骨髓保护作用的药物，以应对恶性肿瘤大剂量化 疗或者血液恶性病的治疗过程中所带来的骨髓抑制副作用。在本实验室前期工作的 基础上，我们利用原核表达pET系统表达了重组人的MIG蛋白，并利用离子交换层 析方法纯化出具有生物学活性的人MIG蛋白，为MIG的功能研究打下了基础。 护作用。对照组注射等体积生理盐水。统计发现，提前注射rHuMIG可以将小鼠的存 活时间由对照组的7．36天提高到9．91天，并且二者在统计学上有极显著差异 对小鼠化疗起到保护作用。 为了进一步探讨MIG保护骨苘的机制，我们对化疗恢复期小鼠注射rHuMIG，然 后分离其骨髓单个核细胞，进行细胞周期检测，发现rHuMIG能够降低单个核细胞 处于S期的比例。取正常小鼠的骨髓细胞，用Ficoll分离后体外进行集落培养， 发现培养基中加入rHuMIG的培养皿中集落总数降低。由此，我们推测rHuMIG通过 抑制造血干、祖细胞进入S期，从而避过S期敏感的化疗药物5-Fu的作用，使得化 疗过程中更多的干、祖细胞存留下来并进入分裂增殖，加快骨髓的恢复。 细胞表面CXCR3的表达情况，发现其中有10种肿瘤细胞表面完全表达或部分表达 响，发现rHuMIG在体外不影响肿瘤细胞的增殖生长。 下肿瘤模型，在正常荷瘤小鼠模型中连续5天以50ug／kg体重的剂量皮下注射 蛋白组的肿瘤重量和对照组相比无显著差异。在正常L1210荷瘤模型中，第1l天处 死小鼠，和在化疗L1210荷瘤模型中第9天处死小鼠，检测其外周血白细胞，血小 板以及骨髓细胞总数的变化，结果发现，和对照组相比，蛋白组小鼠的外周血白细 胞，血小板以及骨髓细胞总数均有所下降，但在统计学上无显著差异。在LLC荷瘤 小鼠化疗模型中，化疗前连续5天注射rHuMIG蛋白，在化疗后第3、5、11天处死 小鼠，检测其外周血白细胞，血小板以及骨髓细胞总数的变化。结果发现：在化疗 后的第3天蛋白组白细胞下降(p值为0．14)，血小板和骨髓细胞均上升(p值分 别为0．003、0．009)。第5天蛋白组白细胞、血小板和骨髓细胞的数目和对照比相 差很小，且统计学上无差异。第11天蛋白组白细胞、血小板的数目和对照组相比均 有所上升，蛋白组骨髓细胞和对照组相比有所下降，但蛋白组实验数据和对照组相 比在统计学上均无显著差异。可能的原因，推测为肿瘤在体内能分泌和造血相关的 细胞因子，掩盖了rHuMIG在化疗过程中对造血系统重建的影响。 综合以上试验结果，我们可以初步得出结论：在化疗前，运用rHuMIG能够在小 鼠化疗后有助于小鼠骨髓抑制的恢复，这为开发rHuMIG作为临床化疗保护剂奠定了 实验基础。 关键词：rHuMIG，化疗，骨髓抑制 2 ABSTRACT Bone isthemostseriousside·effectcaused marrow(BM)suppression by andBM leadstodecreaseofblood cellnumbers．In chemotherapy．Chemotherapy toBM of isinitiated．With3-4 responsedamagechemotherapy,BMregeneration weeks， the BMis thatBM throughhematopoiesis．We damagedrepaired propose regeneration after insults．Inthis initialwork have expresses