培养条件对保加亚乳杆菌蛋白水解体系关键酶基因表达影响的研究.pdfVIP

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2016-02-16 发布于贵州
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培养条件对保加亚乳杆菌蛋白水解体系关键酶基因表达影响的研究.pdf

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培养条件对保加亚乳杆菌蛋白水解体系关键酶基因表达影响的研究

———置皇鼍鼍量署量量—■置量—■■■·———■·■●■■■■●■■■●——暑——量—■邕··■——l—■■■·—■■——■一 ■‘‘JahV7 目录摘要……………………………………………………………………………………………………………．……………………．I 英文摘要………………………………………………………………………………………………III l前言………………………………………………………………………………………………………………………………．1 1．1研究背景……………………………………………………………………………………l 1．2乳酸菌蛋白水解体系简介……………………………………………………………………l 1．2．I胞外酶…………………………………………………………………………………………………………．2 1．2．2转运系统…………………………………………………………………………………．．2 1．2．3胞内肽酶……………………………………………………………………………………．．3 1．2．4乳酸菌的蛋白水解活性………………………………………………………………．4 1．3乳酸菌蛋白水解体系国内外研究现状……………………………………………………………4 1．4基因表达的研究方法…………………………………………………………………………6 1．5课题意义………………………………………………………………………………………………7 1．6课题内容………………………………………………………………………………………．7 2材料与方法……………………………………………………………………………………………………8 2．1材料……………………………………………………………………………………………………………………8 2．1．1菌株……………………………………………………………………………………………………………．．8 2．1．2培养基及培养条件………………………………………………………………………………………8 2．1．3化学药品………………………………………………………………………………………………。9 2．2实验设备………………………………………………………………………………………l0 2．3实验方法……………………………………………………………………………………………．．10 2．3．1菌株生长曲线的测定………………………………………………………………………………10 2．3．2基因表达的检测方法……………………………………………………………………．．10 2．3．3关键酶基因及管家基因的确定…………………………………………………………。ll 2．3．4实时荧光定量PCR引物设计与合成…………………………………………………12 2．3．5RNA的提取………………………………………………………………………………。12 2．3．6反转录合成eDNA…………………………………………………………………………．13 2．3．7实时荧光定量PCR…………………………………………………………………………。13 2．3．8实时荧光定量PCR数据处理分析…………………………………………………………13 2．3．9不同条件下关键酶基因的表达测定………………………………………………………14 3结果与分析………………………………………………………………………………………………………………15 3．1RNA的数量和质量…………………………………………………………………………………………15 3．2实时荧光定量PCR结果……．．．…………．．．……………………．．．…………………………………16 3．3不同菌株之间关键酶基因的表达情况分析……………………………………………………18 3．4不同生长阶段关键酶基因的表达情况分析……………………．．．…………………………………19 I 东北农业大学工学硕士学位论文 3．4．1保加利亚乳杆菌生长曲线…………………………………………………………．．19 3．4．2关键酶基因在菌株不同生长阶段的