溶藻细菌s7溶特性、机理及影响因素的研究.pdf

Study on Algiciadal Characteristics, Algicidal Mechanism and Influencing Factors of Algiciadal Bacteria S7 A Thesis Submitted to Chongqing University in Partial Fulfillment of the Requirement for the Doctor’S Degree of Engineering By Wang Jinxia Supervised by Prof. Luo Guyuan Major: Environment Engineering Faculty of Urban Construction and Environmental Engineering of Chongqing University, Chongqing, China November, 2012 中文摘要 摘 要 随着水体富营养化现象的日益严重，有害藻类水华频繁爆发，探索行之有效 的抑藻和除藻途径极为迫切，溶藻细菌作为一种新的生物控藻手段显示出了广泛 的应用前景。溶藻细菌一般分离自暴发水华的水体，这种土著细菌在工程应用中 具有安全、特异、高效等特点。课题组从三峡库区暴发水华的河流中分离出一株 溶藻细菌，命名为 S7，本文以导致水华暴发的代表性蓝绿藻为研究对象，研究了 该菌的溶藻特性、探讨了溶藻机理并分析了溶藻效应的影响因素。论文的主要研 究内容和结论如下： ① 取生长 24h 的细菌 S7，分别将不同体积的细菌添加到藻液中进行溶藻试 验，结果表明：溶藻作用的发生对投加细菌的体积分数有个下限的要求，初始体 积分数越大溶藻现象越明显，溶藻时间也越短。当细菌的体积分数大于 1:50 时， 细菌 S7 在第 5d 表现出溶藻作用。 ② 细菌溶藻范围和作用效力试验表明：细菌 S7 对铜绿微囊藻、水华鱼腥藻、 水华微囊藻、栅藻和小球藻均具有溶藻作用，但对水华鱼腥藻去除效果最好，对 小球藻去除效果最差，叶绿素 a 的去除率为42.5%～74.8% 。该菌对淡水湖泊中常 见蓝绿藻有良好的去除效果。 ③ 利用光学显微镜、扫描电镜观察溶藻过程，结果显示在溶藻过程中藻细胞 依次经历了以下过程：细胞膜收缩→细胞膜凹陷→细胞膜形成抑痕→细胞膜破裂 →细胞质和色素外泄→细胞死亡。在藻液中分别加入经不同方法处理后的菌液（包 括未经处理的原菌液、高温灭菌 20min 的菌液、0.22μm 滤膜过滤液、经 10000rpm 离心的上清液）进行溶藻试验，结果表明：细菌 S7 通过释放胞外活性物质进行 间接溶藻。 ④ 对细菌 S7 作用过程中藻细胞的叶绿素 a 和藻蓝蛋白含量进行监测，结果 表明：随着藻细胞的急剧减少，藻细胞叶绿素 a 和藻蓝蛋白含量下降明显；对藻 细胞抗氧化系统的变化进行分析，结果表明：在溶藻初期，超氧化物歧化酶 (SOD) 和过氧化氢酶（CAT ）活性显著升高，表明细菌的溶藻作用激发了藻细胞的抗氧 化系统参与反应，但随着细菌的继续作用，SOD 和 CAT 活性下降，表明藻细胞 抗氧化系统遭到破坏，丙二醛 （MDA ）含量也显著提高，说明细菌可以引起藻细 胞膜脂过氧化；藻细胞经过 PI 特异荧光标记后，用流式细胞仪分析藻细胞自发荧 光和特异荧光信号，结果表明：藻细胞的核酸物质和细胞膜均遭到破坏，叶绿素 a 和藻蓝蛋白含量变化与细胞膜的损伤情况具有一致性；藻细胞成分的红外光谱 分析也显示藻细胞解体，蛋白质遭到破坏。据此推测细菌 S7 的溶藻机理为：溶 I 重庆大学博士学位论文 藻物质先损坏藻体的细胞壁和粘质胶被，然后通过改变细胞膜的选