拟南芥新型芥子基因功能的初步研究.pdfVIP

内容提要 植物芥子酶防御系统为白花菜目植物特有，由芥子酶及其底物硫代葡萄糖苷 组成。芥子酶和硫代葡糖苷分别储藏在不同的细胞中，在受到病虫侵袭时，底物 和酶相遇，硫代葡糖苷被降为有毒化合物，起防御作用。对其研究具有重要的意 义。 在拟南芥中，Southem印迹表明存在3个芥子酶编码基因，其中只有两个基 因粥GJ和粥G2已被证明有活性，而粥G3是一个假基因。近年来，在拟南芥 中又发现了三个芥子酶基因，即粥G4、粥G5和粥G6。粥GJ和粥G2都在叶、 子叶、茎和花器官中表达。粥G4、粥G5在根部特异表达。 本研究利用IⅢA干涉技术，初步研究了粥G4和粥G5基因的功能。根据 粥G彳、粥仍编码序列中特异靶序列设计siIⅢA序列。以拟南芥基因组DNA 模板扩增7脱一4基因启动子和终止子，与siI斟A序列连接并克隆到植物表达载 体pBP5中，构建成了siRNA真核表达载体。利用花序浸泡法转化拟南芥，获 得转基因植株。经彳口如基因PCR检测初步证实外源基因已导入拟南芥的核基 因组中。酶活测定的结果显示，粥G4、粥G5基因的表达受到了大部分抑制。 这说明本研究构建的RN～载体对基因表达沉默是有效的。 体pBP6中，构建成过量表达载体。同时利用花序浸泡法转化拟南芥。 果表明，突变体没有明显的表型改变。说明粥G彳和粥G5功能具有冗余性，单 基因的突变不对拟南芥的生长发育产生影响。 主题词：芥子酶粥G4粥G5基因功能表达载体I矾A干涉过量表达 T．DNA插入突变 Abstract areaclaussof matcatalizet11e of MyrosinaSes enzymes hydr01ysismio西ucosides i11 br嬲sicales．Theandmesubs缸tesarestored iIldi仔旨e11t eI：亿ymes s印arately cells， are mixedinfeS枷on are intoto)【ic mey upon bypests，a芏ldtbjo哲uCosideshydrolyzed t0serve鹤def．ense of haus compounds weapons．Thestudymyrosinause important si嘶ficance． Three been myrosinaSesgenes，弼G』，粥G2and粥G3，haVe pr嘶ously w11ichZGG3isa r印ortediIl彳朋6渤唧括珐口眈n口，iIl pseudogene．DatabaSemining oft11e of廿u’eeadditional 4m6f咖筘括genomesuggested也epresence myrosin弱e ref缸ed waS t0 genes t0雒粥饼，粥研and粥G6．RT—PCR analysisp拍med in彳砌口厅口万口．