苹果砧木耐盐突体的筛选及其鉴定.pdfVIP

摘 要 苹果是重要的果树树种之一，主要靠嫁接繁殖，其耐盐性主要取决于砧木。 因此，选择利用具有较高耐盐能力的砧木是提高苹果耐盐性的关键。利用组织 培养与诱变技术相结合选育抗性突变体，可提高耐盐砧木育种效率，获得优良 的新种质。但是经诱变和耐盐性反复筛选而获得的突变体，不排除部分个体是 由环境胁迫而产生的适应性改变，而并非稳定的遗传变异。因此，突变体的鉴 定是诱变育种的关键环节之一。 本试验以苹果砧木7848和EH一78—48为材料，以NaCl作为耐盐选择剂， 采用辐射诱变和组织培养技术相结合的方法，对苹果耐盐突变体的筛选及其鉴 定进行了系统研究。主要研究结果如下： MS+BA2．Omg·L’1斗．NAA0．1mg·L‘1或MS+TDZl．Omg·L‘1+NAAO．1mg·L一， 暗培养时间20d最佳。 两砧木畸形叶比例增加，叶片再生受到明显抑制。 1．O％和1．2％作为 3．选取诱变效应明显的植株叶片进行再生，采用NaCl 选择压，对再生植株进行多代交替盐筛选，获得了耐盐性稳定的突变株系L和 K。 指标进行观察和测定，结果表明：耐盐突变体的存活率明显高于对照，受害率 和受害指数低于对照，表现出较高的耐盐性。受害指数能够综合反映苹果砧木 的盐害程度，能较准确地反映出盐胁迫对砧木的生长抑制作用，可作为描述苹 果砧木耐盐性的形态学指标。 5．研究结果表明在盐胁迫条件下，苹果砧木细胞膜透性加大，MDA、02一 和Cl一含量升高，在处理期间耐盐突变体上述指标含量均显著低予对照，两者之 间差异显著；SOD和POD酶活性、脯氨酸含量增加，在处理期间耐盐突变体明 显高于对照，两者之间差异显著。Na7含量在盐胁迫条件下升高，F含量降低， Na+／K+增大，但耐盐突变体的Na十，K+低于对照水平，说明突变体比对照更能忍 受盐胁迫的伤害。 6．在盐胁迫条件下，苹果砧木耐盐突变体内多胺总量和精胺、亚精胺、腐 胺含量都表现为先上升后下降的趋势，腐胺含量表现为先下降后上升的趋势， (Spd+Spm)／Put比值随着盐浓度的增加而升高。研究发现，不管是多胺总量、 于对照。 逐渐降低：ABA含量增加，耐盐突变体ABA含量明显高于对照。 8．上述指标的相关分析结果表明，MDA含量、超氧阴离子含量、C1。含量、 SOD活性、脯氨酸含量增加，与质膜透性的增加呈正相关，ABA含量与质膜透 性虽也呈正相关，但相关系数较低；突变体的POD活性和多胺含量与质膜透性 呈正相关，而对照与质膜透性的相关系数较低。因此，认为质膜透性、超氧阴 离子含量、C11含量、SOD活性可作为耐盐性的鉴定指标。 9．本研究对78—48及其耐盐突变株系进行了RAPD分析，结果表明在36 个引物中有32个引物有多态性扩增，对5个材料基因组的546个位点进行了检 的突变株系K2的多态性位点为37个。对2个砧木及其各突变株系的多态性和 遗传背景进行统计分析，结果表明各突变株系与对照相比在DNA分子水平上发 生了变异。 lO．对RAPD分析中检测到的多态性片断进行克隆钡4序分析。结果表明，随 相比，确实在DNA水平发生了突变，并且证实突变与耐盐相关。L。虽然在生理 生化和形态学指标上表现出较高的耐盐性，在DNA水平上也检测到了突变，但 克隆测序分析表明，Ll扩增到的多态性片断与耐盐不相关，这说明检测到的突 变可能与其它性状有关，或者是引物筛选量过低造成的，其突变是否与耐盐有 关还需进一步证实。 11．对供试材料进行AFLP分析表明，10对引物组合中有2对引物可以区分 对照和突变株系之间的差异，这2对引物共扩增到118条清晰谱带，出现多态 性扩增，说明突变株体和对照在该位点上存在差异。本研究中2对引物组合共 发现多态性位点68个，占57．63％，说明，被检测的位点中有57．63％的位点在 材料间存在差异。因此，朋几P技术可以用于突变体材料的鉴定。 关键词：苹果砧木；突变体；耐盐筛选：RAPDIAFLP；克隆 andId明tificationofSalt-toIer卸tMutantsof rootstock Screening apple Au吐10r：UZhen—xia