葡萄籽中原花青的提取纯化及其结构和功能研究.pdf

摘要 摘 要 葡萄是世界上经济价值较高的一种水果，为葡萄科(Ⅵtacc∞)葡萄属(vi虹s)植 物。葡萄果实中含有大量的酚类物质，其中30-40％存在于葡萄皮中，60一70％存 在于葡萄籽中。原花青素口roa砒ocy锄id旭简称Pc)是葡萄籽中含量最大的酚类 物质，具有高度羟基化的结构，能够抗氧化、清除自由基、治疗心血管疾病，有 很大的开发利用价值。 经改良的香草醛一盐酸法测定原花青素含量的精密度、准确度比原方法有明 显提高，而且大大提高了显色稳定性，缩短了分析时间。改良后的测定方法快速、 简便、有效，可用于葡萄皮、籽、梗及其提取物中的游离态原花青素含量测定。 在正丁醇一盐酸液中加入SDS和2-巯基乙醇，能够将结合态中的原花青素分离出 来，通过显色反应确定结合态原花青素的含量，其测定结果的精密度和稳定性较 好，可用于葡萄籽、梗中蛋白结合态和纤维素结合态原花青素含量的测定．葡萄 籽中游离态、蛋白结合态、纤维素结合态原花青素含量分别为3．86％、2．93％、 2．80％。在低温条件下贮藏，铝箔真空包装可减少多酚和游离态原花青素的损失 以及向结合态原花青素的转化。 以真空干燥葡萄籽为原料，用70％乙醇提取葡萄籽原花青素，其最佳工艺参 数为葡萄籽粉粒度80．150目、搅拌时间55min、提取温度15℃、加酸量0．75％。 20℃时，HP．2MGL树脂对葡萄籽原花青素的纯化效果最好，吸附率为91．1％， 个峰，说明GSPP3组分中原花青素的组成较为复杂，其中2号峰和4号峰的质 分析，它们主要含有单体和二聚体原花青素。 谱图分析，发现葡萄籽原花青素基本结构单元主要为原花青定。利用LC—Ms对 葡萄籽原花青素醇解产生的花色素进行分析测定，确定为矢车菊素，从而证明葡 萄籽原花青素主要结构单元为花青定，即其B．环上含有两个羟基。 “ 激光光散射与GPC联用测定了葡萄籽原花青素纯化分级级分的重均相对分 围较宽，多分散系数为1．65；乙酰化GsPP3的重均相对分子质量为9．“×10’Da， 1．56，相对分子质量分布曲线呈对称分布，以高聚合度原花青素为主；乙酰化 扛南大学博士论文 为1．89×103Da，平均聚合度为6，多分散系数为1．45，分子量分布曲线基本呈 对称分布，以低聚合度原花青素为主。 DPPH法测定葡萄籽原花青素抗氧化实验结果表明，葡萄籽原花青素纯化物 抗氧化、清除自由基的能力大于Vc和芦丁；茶多酚与GsPP3接近：葡萄籽原花 小鼠血清生化指标和病理切片研究表明，葡萄籽原花青素可以降低高脂模型 小鼠血清总胆固酵和低密度脂蛋白胆固醇的含量，对小鼠的肝脂肪变有一定的缓 解和治疗功能。葡萄籽原花青素对酵母菌的最小抑制浓度lOmg／n1L，对大肠杆 菌的最小抑制浓度为1．25mg，mL，枯草芽孢杆菌的最小抑制浓度为313pg^nL。 葡萄籽原花青素对沙门氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用， 当含菌量约为100个／n1L、原花青素浓度为500“g／埘【L时，对金黄色葡萄球菌抑 屯 菌率为29．6％，当原花青素浓度为lOoo“咖L时，可以完全抑制金黄色葡萄球菌。 { l 而对于沙门氏菌和大肠埃希氏菌来说，当原花青素浓度为1000“鲋【IlI，时，抑制 彳’ 气 作用才较为显现，原花青素浓度为5000“咖L时，抑制作用显著。 ≥ ’ 以R1：N，20乙基纤维素为壁材，以葡萄籽原花青素为心材，当心材与壁材的 o 比例为4：l，总固形物含量为25％，进风温度为160℃时，葡萄籽原花青素微胶 ， 囊化产率和效率最大，分别为93．9I％和95．06％。微胶囊化葡萄籽原花青素光照 贮存三个月原花青素损失率比未微胶囊化减少40．0l％，避光贮存三个月原花青 素损失率比未微胶囊化减少23．71％。以熔点为55℃的复合氢化植物油为壁材， 以葡萄籽原花青素为心材，当心材与壁材比为l：2时，原花青素微胶囊