第11章 色谱分离过程.ppt

第11章 色谱分离过程chromatography 一、 概述 定义： 色谱是根据混合物中，溶质在互不混溶的两相之间分配行为的差别，引起移动速度的不同而进行分离的方法。 起源 几个概念 色谱柱：进行色谱分离用的细长管。 固定相：管内保持固定、起分离作用的填充物。 流动相：流经固定相的空隙或表面的冲洗剂。 色谱流程及 主要部件 二、 色谱分离过程的基本原理 1 分离原理 色谱分离基于各组分在两相之间平衡分配的差异。 以吸附色谱为例见图示 吸附→ 解吸→再吸附 →再解吸 →反复多次洗脱→被测组分分配系数不同→ 差速迁移 → 分离 分配系数的微小差异→ 吸附能力的微小差异 微小差异积累→较大差异 →吸附能力弱的组分先流出； 吸附能力强的组分后流出 2 固定相（色谱柱填料) 硅胶衍生的固定相 离子交换树脂 大孔吸附树脂 凝胶 手性固定相 3 色谱柱及柱技术 色谱柱的装填方法： 高压均浆填充 干法填充 径向压缩法 轴向压缩法 环形压缩技术 三、色谱分离过程和色谱图 图1 色谱过程 图2 色谱图 1 色谱图（chromatogram） 试样中各组分经色谱柱分离后，按先后次序经过检测器时，检测器就将流动相中各组分浓度变化转变为相应的电信号，由记录仪所记录下的信号——时间曲线或信号——流动相体积曲线，称为色谱流出曲线，或色谱图。如图2 常用术语： 基线 在操作条件下，仅有纯流动相进入检测器时的流出曲线。 2. 色谱峰 当组分随流动相进入检测器时，其响应信号大小随时间变化所形成的峰形曲线。正常的色谱峰呈正态分布。 3. 峰高：色谱峰顶点与峰底之间的垂直距离称为峰高(peak height)。用h表示。 4. 峰面积：峰与峰底之间的面积称为峰面积(peak area)，用A表示。 四、色谱分离过程基础理论 1保留值 试样中各组分在色谱柱中停留时间值或将组分带出色谱柱所需流动相的体积值称为保留值。 保留时间?：从进样至被测组分出现浓度最大值时所需时间tR。 2) 保留体积：从进样至被测组分出现最大浓度时流动相通过的体积，VR。 3) 死时间：不被固定相滞留的组分，从进样至出现浓度最大值时所需的时间称为死时间(dead time)，tM。 4) 死体积: 不被固定相滞留的组分，从进样至出现浓度最大值时流动相通过的体积称为死体积(dead volume) ，VM。 2分离度 相临两组分间峰顶间距离除以此两峰底宽的平均值,衡量色谱分离条件优劣的参数 3柱效率 塔板理论认为，一根柱子可以分为n段，在每段内组分在两相间很快达到平衡，把每一段称为一块理论塔板。设柱长为L，理论塔板高度为H，则 H=L/n 式中n为理论塔板数。 理论塔板数可根据色谱图上所测得的保留时间（tR）和峰宽（w）或半峰宽（ wh/2 ）按下式计算： 或 有效塔板数（neff） 用有效塔板数（neff）来评价柱的效能比较符合实际。 五、 色谱的分类 1）、按两相所处的状态分类 2）、 按固定相的几何形式分类 A 柱色谱法 B 纸色谱法 C 薄层色谱法 A.柱色谱法 (column chromatography) 柱色谱法是将固定相装在一金属或玻璃柱中或是将固定相附着在毛细管内壁上做成色谱柱，试样从柱头到柱尾沿一个方向移动而进行分离的色谱法。 B.纸色谱法（paper chromatography） 纸色谱法是利用滤纸作固定液的载体，把试样点在滤纸上，然后用溶剂展开，各组分在滤纸的不同位置以斑点形式显现，根据滤纸上斑点位置及大小进行定性和定量分析。 C.薄层色谱法 (thin-layer chromatography, TLC) 薄层色谱法是将适当粒度的吸附剂作为固定相涂布在平板上形成薄层，然后用与纸色谱法类似的方法操作以达到分离目的。 3）、按分离原理分类 按色谱法分离所依据的物理或物理化学性质的不同，又可将其分为： 1.吸附色谱法 2.分配色谱法 3.离子交换色谱法 4.尺寸排阻色谱法 5.亲和色谱法 1.吸附色谱法 ( adsorption chromatography ) 利用吸附剂表面对不同组分物理吸附性能的差别而使之分离的色谱法称为吸附色谱法。