人脐带胶质间充干细胞的分离培养与特性研究.pdfVIP

摘 要 细胞治疗已经走过十多年的历程，起初科学家对免疫细胞进行大量研究，如细胞 因子诱导的杀伤细胞 （CIK ）治疗癌症具有可观的前景；而目前科学界对人脐带间充 质干细胞（Human umbilical cord mesenchymal stem cell, hUC-MSC ）的研究较为关注， 由于hUC-MSC 比胚胎干细胞（ESC ）、骨髓间充质干细胞 （BM-MSC ）等具有更好的 临床应用潜能，从而成为人类再生医学和组织工程的研究热点。 本研究目的是探索更有效的hUC-MSC 分离培养方法和进一步研究hUC-MSC 生 物学特性，通过建立优化的实验方法，能为再生医学科研和临床应用提供操作规范标 准和参考依据。方法：实验随机选取足月顺产健康胎儿脐带，采取手工机械分离法和 3 种酶组合消化法从脐带胶质中释放人脐带间充质细胞；并用优化完全培养基纯化培 养；MTT 法检测各代脐带间充质细胞生长增殖活性并绘制生长曲线；流式细胞术检 测脐其生长周期和表面标志物；RT-PCR 扩增基因P53 、C-myc 和OCT-4 ；结果：培 养脐带间充质细胞形态为梭形、呈纤维样，并出现流水状或漩涡样生长；生长增殖速 度较快，第7 代脐带间充质细胞指数倍增时间小于30h ；80% 以上细胞处于G0/G1 期； 培养脐带间充质细胞均一稳定高表达CD29、CD70、CD105、CD90 和CD44 ，而几乎 不表达CD45、CD34 和HLA-DR ；P53 基因在各代脐带间充质细胞均有表达，C-myc 基因在第4 代和第18 代出现明显表达，OCT-4 基因在不同代数均出现表达；结论：1） 4 1h 可分离 30cm 脐带胶质，获得的大量脐带间充质细胞 （910 /cm ），经培养检测证 明具有hUC-MSC 的形态特征、增殖活性，表面抗原一致，是原始的hUC-MSC ；2 ） 通过RT-PCR 检测各代脐带间充质细胞的P53、C-myc 和 OCT-4 基因，发现培养10 代以内hUC-MSC 状态较正常。本研究意义：提示在临床应用hUC-MSC 时，对其癌 基因和抑癌基因全面检测以及衰老凋亡系统检测很有必要；本实验可为短期培养扩增 出临床治疗所需要安全可靠的MSC 提供研究基础，可为避免hUC-MSC 体内移植治 疗产生致瘤性提供参考依据。 关键词：脐带胶质；人脐带间充质细胞；人脐带间充质干细胞 Isolation, Culturing and Characterization of Mesenchymal Stem Cells Derived from Human Umbilical Cord Abstract Cell therapy has more ten years progress. At first, scientists abundancely studied immunocyte, such as cytokine-induced killer cells theating cancer that had considerable prospect; Moreover now scientists to pay close attention to human umbilical cord mesenchymal stem cell(hUC-MSC), because hUC-MSC has more good clinical practice proficiency than embryonic stem cell and bone marrow mesenchymal stem cell, thereby become reseaching hotspot of human medicine and tissue engineering. The puepose of this study was exploring a more effectiv