北京油鸡部分重形状基因克隆及purh基因3种表达载体构建.pdfVIP

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2016-02-20 发布于贵州
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北京油鸡部分重形状基因克隆及purh基因3种表达载体构建.pdf

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北京油鸡部分重形状基因克隆及purh基因3种表达载体构建

摘要 receptorl、IFNctreceptor2、利用RT-PCR方法扩增PURH、CD3D、CD3e、CD8a、IFNa 构建北京鸡成纤维靶细胞系。提取北京油鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌等因的3种真核重组表达载体。脂质体介导导入北京油鸡体外培养成纤维细胞中，对 PURH基因的时空表达、亚细胞定位、阳性细胞生长、增殖状况、细胞活力以及提高基因表达率的最佳方法等方面进行了深入的研究；并利用G418药物筛选和对荧光强度高的单克隆化培养。实验结果如下： ‘ 1．将lO个基因侧序后提交Genbank。 2．根据ATCC的细胞库鉴定内容与评价标准，对所构建细胞系进行了生物学性状研究、鉴定和综合评价，所得结果显示未发生物种间细胞的交叉污染和恶性转化，遗传性能稳定。 3．在转染后24、48和72h，重组融合蛋白转染率在10．3％一53．2％之间。核与细胞质均有分布，呈弥散分布。经药物筛选和单克隆化培养，获得表达经RT-PCR扩增与Westernblot检测确认了PURH融合蛋白基因已经整合到北京油鸡成纤维细胞的基因组中，获得正常表达。关键词：北京油鸡：成纤维细胞：PURH基因；荧光蛋白 ofthePartial Traits of Gene Chicken Cloning Important BeijingFatty andConstructionof3KindsofPURH Vector Expression Abstract PURH，CD38，CD3c，CDSct，IFNareceptorl，IFNareceptor2，IFNyreceptor2， of obtainedRT-PCR RBMX，PEPD，WRB，theBerfattychicken，were by genes ing the toadherent succeededin amplification．Usingorganization culture，we constructing’ chickenfibroblast cell． Beijingfatty specifictarget The ofPURHin8differenttissuesof chicken specificexpression gene Beijingfatty WaS RT-PCRinthis full ofPURHcDNAWaSinserted investigatedby study．Thelength intofusion vector and cloning expressionpEGFP·N3，pEYFP-N1pDsRedl-N1multiple BamHconstruct vector sitesbetweenEcoRIand I，and recombinant eukaryoticexpression and with