家蚕分子连锁图的构建和低分子量热激蛋白基因的克隆与特异表达.pdf

2家蚕分子连锁图的构建 川1 2．1 586个多态性能点出现。平均为4．3位点／引物。在5％水平上，经r检测后，有470 215个。 个位点，占总数的80．2％符合3：l的分离比，其中大造255个，C，m 2．2本研究经多次验证发现，只要保持反应条件不变，严格控制反应程序的各个环 节，保证反应体系中的多种试剂来源和浓度一致并不受污染，则可保证其扩埔有 较好的稳定性与重复性。 的分子连锁图，结果如下： qE群中龠lO：{个似A连 锁群命名为a彬群．C，。的16个连锁群命名为b娅群。存a 锁，非连锁的位点有152个。在b亚群中有79个位点连锁，非连锁位点有126个。 2．3．2a亚群中各连锁群上标记数目变化范围在2～24个，连锁群的长度变化在 4．5个，连锁群的平均长度为49．7cM。 2．3．3b亚群中各连锁群上标记数目变化范围在2～12个，连锁群的长度变化在 4．9个，连锁群的平均长度为69．OcM。 2．3．4在a亚群中，标记数目与连锁群长度进行相关分析，相关系数R．为0．9958， 在b亚群中，进行同样的相关分析，相关系数毗为0．9705。这表明了连锁群的长 度‘j标也数目的多少呈||卜十H哭。 2．3．5在a、b两亚群中，分别对每连锁群的平均遗传图距对每染色体上的标记 数进行回归分析。回归系数分别为-0．6269，0．1269，表明了连锁群的平均图足I!与 每染色体t的标记数无宜接关系。 2．3．6 摘要 l 所构建的这个分子陶在长度li与其较为接近。 3肾脏型舡卵荧光差异显示 3．1本实验逐步改进了荧光差异显示反应体系，目前已建立一套相对稳定，且重复 性良好的FDD-PCR操作技术。 3．2 24hr的正常型(+24其母蛾基因型为+／kD，与膏j型(k124，其母蛾基因型为ki／ki) 进行差异显示，4组引物共扩增出376条带，平均每组引物扩增带为94条，较强 的扩增带共为157条，平均每组引物为39条。 3．3 段为206条，占总片段的2．5％，而卉j同质型与七j异质型的差异片段为141条， 占总片段数的1．7％。其余的95．8％的扩增片段为4方共有。我们回收了较明显的 差异片段计199条，占总扩增带数的2．4％。 3．4我们对部分差异片段进行了序列分析，表明其中5个克隆序列分别为：sin；t[1 heatshock like i n， proteirls，Proproteinconvertase，Cancerantigenprote Fusion like kinase同源序列，其余 RNA—bindingprotejfl及Receptorprotein 5个克隆序列未发现同源性。 4克隆Bmhsp20．8A与Bmshp20．8B基因 4．1 10“pfu／ml与2．43×10“pfu／ml，满足克隆目的基因的需要。 4．2 eDNA部分序列 为探针筛选+／ki eDNA克隆，我们分别将其命私为 eDNA文库时，得到两种shsps Bmhsp20．8A与Bmshp20．8B。 4．3 列与其eDNA序列具有完全一致性，表明Bmhsp20．8A为无内含子基因。 Genbank中登录(登录号为：AF315317-AF315319)。 4．5 发现它与印度谷螟的Piacp25，果蝇的胚胎致死基因l(2)lef具有高度同源恺。 与1)mhsp27等的同源性在46．7％一76．5％。 较高同源性，经分析后将它们归为4类，这4类中的代表片段为W5527、W5443、 Bmhsp20．1、Bmhsp21．4与Brahsp23．7。 58HSP8基因的表达 5．1sHSPs基因在5龄期后部丝腺中的表达：在未经刺激时sHSPs的表达可大致分 3或第4天时才开始表达并随时间的推移而渐次增加，在5龄的第5：6同时达到高 峰：■类是Bm