小反刍兽疫病毒苗株与4系野毒株rt-pcr鉴别方法的建立及岩羊分离株的基因序列分析.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………．．．．O OI………………………………I 英文摘要…………………………………………………………………………………………………III 符号说明………………………………………………………………V 第一章小反刍兽疫的研究进展…………………………………………………1 l小反刍兽疫病毒简介……………………………………………………．．1 1．1病原的发现…………………………………………………………．．1 1．2小反刍兽疫病毒的流行概况……………．………………………………．．2 1．3PPRV的特征…………………………………………………………．2 I．4小反刍兽疫病毒最新研究进展……………………………………………．．3 2流行病学………………………………………………………………4 2．1易感动物……………………………………………………………．4 2．2地理分布……………………………………………………………．4 2．3传播途径……………………………………………………………．5 2．4临床症状……………………………………………………………．5 3小反刍兽疫诊断技术最新研究进展…………………………………………．．5 3．1样品采集……………………………………………………………．6 3．2免疫学试验方法…………．……………………………………………6 3．3病毒分离鉴定………．………………………………………………．．7 3．4RT—PCR………．……………………………………………………．．7 3．5病毒中和试验………………………．………………………………．．8 4中国小反刍兽疫病毒病风险初步分析…………………………………………．8 5防控……………………．…………………………………………．．10 5．1小反刍兽疫病毒在我国传播的风险控制……………………………………．10 5．2免疫和治疗…………………………………………………………．12 第二章RT-PCR鉴别小反刍兽疫病毒疫苗株与4系野毒株检测方法的建立………………．．14 1材料与方法…．……………………．…………………………………．14 1．1生物材料……………………………．……………………………．．14 1．2病料………………………………………………………………．14 1-3试剂和仪器…………………………………………………………．14 1．4引物的设计…………………………………………………………．15 1．5病毒RNA的提取………………………………………………………15 1．6RT—PCR扩增条件的优化…………………………………………………15 1．7灵敏度试验…………………………………………………………．16 1．8专一性试验…………………………………………………………．16 2．实验结果……………………………………………………………．．16 2．1PCR扩增条件的优化……………………………………………………16 2．2灵敏度试验……………………………………………………，……17 2．3专一性试验…………………………………………………………．17 2．4PPRV野毒病料与疫苗毒的对比检测试验……………………………………．18 3讨论…………………………………………………………………19 第三章RT—PCR检测方法的应用… ………………………………………．．21 l材料…………………………………………………………………21 1．1病料………………………………………………………．………21 1．2试剂及仪器…………………………………………………………．21 1．3病料的处理及RNA的提取………………………………………………．．22 1．4 1．5 2结果………………………………………………………………．23 2．1 2．2 3讨1淦………………………………………………………………．24 1材料………………………………………………．………………．．26 1．1病料来源…………………………………………．………．………．26 1．2主要分子生物学试剂…………．………………………………………．26 1．3主要仪器设备………………………．………………………………．27 2方法…………………………………………………………………27 ● 2．3全基因组序列的测定、拼接、分析…………………………………………30 2．4与其他病毒株