己烷雌酚抗体的备与elisa方法的建立.pdfVIP

摘要 摘要 题名 己烷雌酚抗体的制各和ELISA方法的建立 姓名 王丽英 导师 胥传来 专业 动物营养与饲料科学 动物性食品的安全问题已成为社会各界极为关注的食品安全热点问题。己烷雌酚残留因为其潜在的 致癌性以及其它不良作用对人类的健康造成极大的威胁。本论文旨在研究快速检测己烷雌酚(Hexoesnol, HEs)的ELISA试剂盒，这对食品安全监督以及技术储备都有重要的意义． semm albumin， 本课题首先对lIES进行衍生化，然后用混合酸酐法分别与牛血清白蛋白(Bovine BSA)、卵清白蛋白(Ovalbumin，OVA)以及辣根过氧化物酶(Horseradishpemxidase．HRP)交联，制 IES-OVA和酶标抗原HES-HRP。通过紫外分光光度法鉴定其合成 备成免疫抗原HES-BSA、包被抗原l 血清，产生的抗血清效价最高达到16000。然后以此抗体为基础设计了间接竞争ELISA方法以及直接竞 争ELISA法，并优化了包被时间、pH、竞争时间等实验条件。优化后的间接法和直接法的检测限分别 达到0．05ng／mL和0．04ng／mL，50％的抑制率(50％inhibitory 0．53ng／mL。直接法总耗时只需大约1．6h，间接法则需要4．65h。用己烯雌酚、双烯雌酚以及激素类药物 l旷去甲基睾酮、孕酮、睾酮、雌酮来检测此方法的特异性，除了己烯雌酚以及双烯雌酚的交叉率较高之 外(间接法中分别为25％和6％，直接法分别为0．5％和0．3％)，其余的均小于0．1％。对猪肉、牛肉、鱼 结果较为一致。本文还对试剂盒的稳定性进行了研究，间接法中低温3个月以及37(2保存6天的实验验 证了试剂盒的稳定性。直接法中，试剂盒在一个月的冷藏中也较为稳定。综合各因素，本论文研究的ELISA 方法各项参数都达到了检测的需要，可用于实际检测。 关键词：兽药残留；己烷雌酚；抗体制备；间接ELISA；直接ELISA ABSTRACT ABSTRACT forhexoestroland immtmusorbem Title：Preparationofantibody ofenzyme-linked development assays Name：LiyingWang Xu Supervisor：Chuanlai NutritionandFeedScience Major．Animal The animal foodhasbecomeahot intllefood varioussocial of derived safety spot safetyindustry,and to are to because circlesare closeattentionit．HexoestroIresiduesharmfulhumanhealth oftheir paying and0t11日adverse thedetermination potentialcarcinoganicproperties effects．Kitsfor beenresearchedinthe is forfood and safety