检测猪肺表面活蛋白ad基因实时荧光定量和纳米pcr方法的建立.pdfVIP

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2016-02-20 发布于贵州
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检测猪肺表面活蛋白ad基因实时荧光定量和纳米pcr方法的建立.pdf

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检测猪肺表面活蛋白ad基因实时荧光定量和纳米pcr方法的建立

皇皇鼍墨皇蔓皇皇皇曼曼皇皇量量皇皇曼曼曼置舅舅詈寰皇曼曼曼舅笪寡量曼置舅曼舅一一一“型”型”=。=X“省’一目录摘|墓…………………………．…………………………………………………………………………………………………………．I 英文摘要………………………………………………………………………………………………Ill 1前言…………………………………………………………………………………………………．1 1．1猪呼吸系统疚病及其危害……………………………………………………………………1 1．2猪呼吸系统免疫防御…………………………………………………………………………1 1．2．1非特异性与特异性免疫防御……………………………………………………………1 1．2．2肺表面活性蛋白与呼吸系统免疫防御的关系…………………………………………2 1．3SP．A／SP．D的研究现状………………………………………………………………………一3 1．3．1SP．A／SP．D基冈的生物学特性…………………………………………………………．3 l-3．2 SP。～SP．D临床检测的意义……………………………………………………………．．4 1．3．3 SP．A／SP．D的一般检测方法……………………………………………………………．．4 1．4荧光定量PCR检测方法的原理及发展……………………………………………………．5 1．5纳米PCR检测方法的发展……………………………………………………………………6 1．6研究的目的与意义………………………………………………………………………………．6 2材料与方法…………………………………………………………………………………………8 2．1材料…………………………………………………………………………………………………………………………．8 2．1．1SP．A／SP—D基冈…………………………………………………………………………．．8 2．1．2主要试剂…………………………………………………………………………………8 2．1．3主要仪器…………………………………………………………………………………．8 2．2方法…………………………………………………………………………………………………………………………．8 2．2．1引物、探针的设计与合成………………………………………………………………8 2．2．2重组质粒的构建…………………………………………………………………………．9 2．2．3荧光定量PCR方法的建立及特异性鉴定……………………………………………10 1 2．2．4荧光定苗PCR方法的敏感性实验……………………………………………………．1 I 2．2．5荧光定餐PCR方法的重复性实验……………………………………………………．1 l 2．2．6纳米PCR检测方法的建立……………………………………………………………1 2．2．7纳米PCR检测方法的敏感性测试……………………………………………………ll 2．2．8猪SP．A／SP．D基冈皆通PCR对比实验………………………………………………11 3结果与分析………………………………………………………………………………………一13 3．1重组质粒的构建及引物特异性的鉴定……………………………………………………．．13 3．2荧光定馘PCR方法标准曲线绘制…………………………………………………………14 3．3荧光定鲑PCR方法敏感性分析……………………………………………………………．16 3．4荧光定堵PCR重复性分析…………………………………………………………………16 3．5纳米PCR检测猪SP．A／SP．D基冈方法的建立及敏感性实验…………………………．．18 3．6普通PCR对比实验结果………………………