树突状细胞在布氏菌疫苗诱导免疫应答中的作用研究.pdfVIP

摘要 布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种人兽共患传染病，主要经消化道、呼吸道和 泌尿生殖黏膜以及皮肤伤口感染，引起母畜流产和人的“波浪热’’等疾病。大量研究 证明，巨噬细胞是布鲁氏菌的易感细胞。巨噬细胞被布鲁氏菌感染后，由于布鲁氏菌 在其胞内生存并大量繁殖，使它的抗原提呈能力丧失，不能提呈布鲁氏菌的抗原，从 而使免疫功能遭到破坏，导致持续性感染的发生。因此，如何帮助患病动物建立有效 的免疫应答机制是当前一个重要的研究课题。 适应性免疫应答的启动需要树突状细胞(dendriticcells，DCs)的抗原提呈，不仅如 此，DCs还能交叉提呈非复制性抗原，故被称为机体最强大的抗原提呈细胞，但目前 尚不清楚DCs是否提呈布鲁氏菌抗原及其可能的机制。 为探明阴道黏膜DCs是否参与布鲁氏菌抗原提呈，研究者模拟自然感染途径给 BALB／c小鼠阴道接种了布鲁氏菌冻干疫苗，然后，比较不同时间内阴道引流淋巴结 内DCs的动力学变化。结果发现，与对照组相比，接种布鲁氏菌冻干疫苗12h后， 小鼠髂内淋巴结中的DCs数量开始增多，散在分布于皮质区；48h后阴道黏膜DCs 向髂内淋巴结的迁移达到顶峰，在淋巴结T细胞区聚集，此时细胞密度较大，多个细 呈单个分布。而对照组未见类似改变。同时，用ELISA法对阴道接种布鲁氏菌冻干 疫苗的小鼠血清中IFN吖水平进行了检测，结果显示，接种疫苗12h后，小鼠血清内 与对照组相比，差异极显著(23．6507+1．4727 以上结果表明，阴 pg／mL，P0．01)。 道黏膜DCs就是布鲁氏菌抗原的提呈细胞。 由于巨噬细胞是野生型或疫苗布鲁氏菌的主要吞噬细胞，所以，为了进一步探讨 DCs提呈布鲁氏菌抗原的机制，研究者采取了清除BALB／c小鼠阴道巨噬细胞的处理 方法，以便为树突状细胞提供更多捕获布鲁氏菌抗原的机会，并模拟自然感染途径， 阴道接种了布鲁氏菌疫苗，然后，比较不同时间内阴道引流淋巴结内DCs的动力学 髂内淋巴结中DCs数量开始增加，散在分布于皮质区。24h后淋巴结内DCs散在分 布于副皮质区，在48h后，DCs向髂内淋巴结副皮质区的迁移达到顶峰，至72h，髂 内淋巴结内DCs的数量有所下降，在皮质区和副皮质区内呈现散在分布状。实验组 的数量没有明显变化。同时，用ELISA法对阴道接种布鲁氏菌冻干疫苗不同时间的 小鼠血清IFN-丫和IL．4水平均进行了检测。结果显示：对照组的小鼠接种疫苗12h 24h后，接种疫苗组小鼠血清内的IFN吖含量明显升高，与PBS组相比，差异显著 (48．75084-2．4373 但与PBS组相比，差异还是显著(51．55114-2．0772 pg／mL，P0．05)。实验组小鼠接 鲁氏菌的抗原提呈细胞，但其抗原提呈过程具有巨噬细胞依赖性特征，并且主要引起 Thl型免疫应答。 为阐明DCs提呈布鲁氏菌抗原对巨噬细胞的依赖本质，研究者进行了体外布鲁 色，镜下观察，结果发现，在荷载布鲁氏菌疫苗2h后，巨噬细胞内出现被吞噬的布 鲁氏菌，尔后在6h一12h期间，其胞内细菌数量增多，到12h后，巨噬细胞出现质膜 破裂、胞质脱落和细胞核固缩的现象。这表明巨噬细胞可能以细胞碎片或膜包小泡的 方式向DCs传递抗原。 从以上结果可以得出如下结论：阴道黏膜DCs是布鲁氏菌的抗原提呈细胞，其 提呈布鲁氏菌抗原的过程具有巨噬细胞依赖性，并且主要诱导Thl型细胞免疫应答。 关键词：树突状细胞；布鲁氏菌；抗原提呈；巨噬细胞 DendriticCells aPivotalintheImmune to Role BrucellaVaccine Plays Response Author．HeYuan-na Jia-xin Supervisor：ProfessorWang Me