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牛病毒性腹泻病ns3基因片段的原核表达及间接elisa检测方法的初步建立
目录
摘；要………………………………………………………………………………………………………………………………………．1
ABSTRACT……………………………………………………………………………………………………………………………．．3
英文缩写词表……………………………………………………………………………………………1
文献综述…………………………………………………………………………………………………～6
1综述前言………………………………………………………………………………………………．6
2BVDV形态及理化特性………………………………………………………………………………．．6
3BVDV分型．……．…………．．…．…………………．…………………………………………………………………………………6
4BVDV基因组结构与功能……………………………………………………………………………．7
5BVDV基因组编码的蛋白……………………………………………………………………………．8
6流行病学研究进展……………………………………………………………………………………11
7实验室诊断技术研究进展……………………………………………………………………………16
8BVD防治研究进展…………………………………………………………………………………。20
试验一猪源牛病毒性腹泻病毒的流行初探…………………………………………………………23
1材料…………………………………………………………………………………………………一23
1,1样品来源……………………………………………………………………………………………23
1．2主要仪器及设备……………………………………………………………………………………23
1．3主要试剂及工具酶…………………………………………………………………………………23
1．4载体及菌株…………………………………………………………………………………………23
1。5质粒DNA提取用溶液……………………………………………………………………………．23
2方法…………………………………………………………………………………………………………………………………．24
2．1引物设计与合成……………………………………………………………………………………24
2．2分离毒株总RNA的提取…………………………………………………………………………．24
2．3RT-PCR……………………………………………………………………………………………………………………………．24
2．4PCR扩增产物的凝胶电泳…………………………………………………………………………25
2．5PCR产物回收………………………………………………………………………………………25
2．6目的基因的克隆、鉴定……………………………………………………………………………26
2．7目的基因序列测定及分析…………………………………………………………………………29
3结果……………………………………………………………………………………………………………………………………29
3．1实验样品的BVDV套式PCR扩增结果…………………………………………………………．29
3。2扩增片段的克隆及鉴定……………………………………………………………………………30
3．3核苷酸序列及氨基酸序列同源性比较分析………………………………………………………31
l
3．4测得毒株基因亚型的确定…………………………………………………………………………3
4讨论……………………………………………………………………………………………………………………………………．32
试验二BVDVNS3基因片段在大肠轩菌中的表达…………………………………………………．34
1蒯f料……………………………………………………………………………………………………………………………………34
1．1病毒和阳性血清……………………………………………………………………………………34
1．2主要仪器与设备……………………………………………………………………………………34
l。3主要试剂与工具酶…………………………………………………………………………………34
1．4载体和菌株…………………………………………………………………………………………3
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