犊牛腹泻轮状病分离鉴定及rt-lamp检测方法的建立.pdfVIP

『JOIIPillIIIII Y21431 23 摘要 轮状病毒(Bovine (Rotavims)，是引起各种幼龄动物病毒性腹泻的主要病原之一。该病自报道以来， 己在全世界主要养牛国家普遍发生和流行，给养牛业造成严重的经济损失。常用检测 isothermal DNA聚合酶完成靶序列的 amplification，LAMP)通过具有链置换特性的Bst 扩增，仅需恒温就能扩增核酸，并可通过核酸染料染色或者离心沉淀观察结果，较之 普通的RT-PCR方法，具有简便、快速的特点。 对保定地区发病牛场的犊牛腹泻病料进行处理，得到疑似病毒液，然后将其接种 性引物。用此引物对出现细胞病变的培养液进行RT-PCR检测，所得目的片段与预期 析结果与预期的结果相同。对该毒株的理化特性鉴定结果表明：该株牛轮状病毒不耐 热，对氯仿、强酸、乙醚有良好的抵抗力。证实本研究分离出的病毒为牛轮状病毒， 命名为BD株。 进行引物设计。利用Primer 意事项进行引物设计，并对设计出的引物进行筛选，最终确定一组，包括外引物F3、 优化的各组分浓度分别为：M孑+2．5此，dNTPs3．51．tL，BstDNA聚合酶1．5p．L；外引 试验结果显示无交叉反应存在，说明该检测技术特异性较好；批间和批内的检测结果 无明显差异，说明该检测方法相对稳定，重复性较好。用本试验建立的RT-PCR和 到100％。本研究成功建立了BRV的RT-LAMP检测技术。 关键词：牛轮状病毒；分离鉴定；环介导等温扩增技术；检测 IsolationandIdentificationofPorcine Virusand Encephalomyocarditis ofDetectionaRT-LAMPMethod by Author：WeiLi Sun Advisor：Prof．Jiguo Medicine Veterinary Major：Preventive Abstraet BovinerotavirustoReoviridae is belongs family,Rotavirusgenus．Itmajorpathogen ofcalfviraldiarrhea．Thedisease acrosstheworldandhascausedfinancial spreads great useddetection universalin losses．ImPCRandELISA，as methods，are commonly hardly clinic duetotheneedfor and researchers．Soa diagnosis