猪蓝耳病病毒np2基因主要抗原区域的原核表达及间接elisa检测方法的建立.pdfVIP

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2016-02-20 发布于贵州
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猪蓝耳病病毒np2基因主要抗原区域的原核表达及间接elisa检测方法的建立.pdf

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猪蓝耳病病毒np2基因主要抗原区域的原核表达及间接elisa检测方法的建立

目录摘要…………………………………………………………………………………………………1 ABSTRACT………………………………………………………………………………………………………………．．：；英文缩写词……………………………………………………………………………………………………．．5 文献综述………………………………………………………………………………………．6 1综述前言……………………………………………………………………………………．6 2 PRRSV的生物学特性…………………………………………………………………………6 3 PRRSV分子生物学研究进展…………………………………………………………………8 4PRRSV的遗传变异………………………………………………………………………13 5PRRSV致病机理的研究进展………………………………………………………………16 6PRRSV免疫学研究进展………………………………………………………………………l7 7PRRSV流行病学的研究进展………………………………………………………………．．19 8PRRSV诊断技术的研究进展…………………………………………………………………2l 9研究的目的意义…………………………………………………………………………………………24 试验一高致病性猪蓝耳病病毒NSP2基因主要抗原区域在大肠杆菌中的表达…………………25 1材料与方法…………………………………………………………………………………25 1．1材料 …………………………………………………………………………………………………25 1．1．1病毒和阳性血清………………………………………………………………………………………．．25 1．1．2载体和菌株……………………………………………………………………………．．25 1．1．3主要仪器与设备…………………………………………………………………………………………．25 1．1．4主要试剂与工具酶……………………………………………………………………………………．．26 1．1．5主要溶液方……………………………………………………………………………26 1．2方法 …………………………………………………………………………………………………．．29 1．2．1RT-PCR…．．．．．………．．．．．．．．．．．．．．．．．．．……．．．．．．．．．．．…．…．．．．．…．．．．．．．．．．……………．…．．．．．．……．…．．…………．．29 1．2．2PCR扩增产物的凝胶电泳…………………………………………………………………………．．3l 1．2．3目的基因的回收…………………………………………………………………………．．3l 1．2．4目的基因与载体的连接………………………………………………………………………．．3l 1．2．5感受态细胞的制备………………………………………………………………………………．32 1．2．6连接产物的转化………………………………………………………………………………………．33 1．2．7碱裂解法小量制备质粒DNA……………………………………………………………………．．33 1．2．8重组质粒鉴定…………………………………………………………………………………………．33 1．2．9目的基因序列测定及分析………………………………………………………………………．．35 1．2．10原核表达载体的构建……………………………………………………………………………．．35 1．2．11重组质粒的诱导表达…………………………………………………………………………．38 1．2．12最佳诱导条件的确定………………………………………………………………………………38 1．2．13表达产物的检测…………………………………………………………………………………．38 2结果…………………………………………………………………………………………………………………．39 2．1目的基因片段的扩增………………………………………………………………………．40 2．3重组表达质粒pET-dNSP2的鉴定………………………………………………………………．．4l 2．4表达产物的SDS．PAGE电泳检测………………………………………………………………42 2．5表达条件的优化…………………………………………………………………………………………．42 2．6Westernblot分析……………………………