猪输血传播病毒行病学调查与cap蛋白表达及感染性克隆构建.pdfVIP

摘要 transfusiontransmitted teno 猪输血传播病毒(Porcine virus，PTTV)或(Porcinevirus9 torque circovirus 研究显示，硎可能与猪圆环病毒2型(Porcine 2，PCV2)感染猪引起的断奶 type 仔猪多系统衰竭综合征有一定协同致病作用，因为这两种病毒常以混合感染形式流行。 别位于520nt-～2594nt和720nt--2170 lit区间。表明我国猪群中有mv与PCV2混合感染存 在，两种病毒混合感染引起的相关疾病可能存在一定依存度；唧1和P1TV2基因型变异幅 度较大，具有遗传变异多样性。 readingfla／lleS，ORFs) P1]Ⅳl和PTlV2基因组结构相似，有3个大的开放阅读框(Open 要结构组成蛋白，能够刺激机体产生体液和细胞免疫反应，是建立检测诊断方法的理想靶抗原。 为了开展该病毒血清学诊断方法的建立，本研究对P11Ⅳ2的ORFl基因进行扩增，并克隆至 细胞，以终浓度为l kDa， 功，为下一步开展该病毒诊断技术的研究奠定了基础。 鉴于原核表达系统不能对编码的蛋白质进行正确加工和折叠等缺点，而真核表达系统能克 TOPO TA载体，分 服这一缺点的优势，本研究将P1厂rV2．ORFl基因插入到pBlueBac4．5／VS-His Bat-N-BlueTM DNA共转染昆虫细胞(S也1)，经3次病毒蚀斑克隆，获得了2株重组杆状病毒， 分别表达全长和截短的1Tv2 blot 组杆状病毒毒种接种昆虫细胞进行重组蛋白表达，优化表达条件，用SDS和Western 鉴定表明，表达的全长和截短重组蛋白分子质量分别为79kDa和43kDa。在重组蛋白C末端 设计了6×His-Tag标签，采用Ni2+亲和层析法进行了蛋白纯化。本研究为该病毒血清抗体检测 和疫苗免疫的研究奠定了基础。 迄今为止，尚未见有硎在体外分离成功的报道。为了获得P11V2毒株，本研究采用 感染性分子克隆技术，克隆P11V2全长基因组，经酶切和自我环化操作获得感染性克隆，采用 脂质体法将环化的病毒基因组转染猪睾丸细胞系(ST)和猪肾细胞系(PKl5)，对拯救的病毒 进行细胞传代，取各代次培养物进行PCR检测，第1～6代培养物病毒核酸检测结果均呈阳性， 但第7～9代核酸检测结果呈阴性，推测ST和PKl5细胞系可能不适于该病毒的增殖。 关键词：猪输血传播病毒，猪圆环病毒2型，原核表达，杆状病毒表达，感染性克隆 Ⅱ Abstract Porcinetransfusiontransmittedvirus(FnV)orPorcinetenovirus(PTTV)hastwol【ind torque roleofbothPrTVlandP1TV2 andfrITV2．The inthe ofspecific ofge