猪抵抗素基因克，表达及elisa检测方法的建立.pdfVIP

猪抵抗素基因克隆，表达及ELISA检测方法的建立 摘要 较，发现投苷酸序列同源性在67％～87％之州，氮基酸序列同源性在56％～79％之 间，说明不同物种之间RSTN基因差异较大。 根据RS’烈基因测序结果设计另一列引物，用PCR方法扩增到RSTN基因并将 杆菌皿一21(DE3)感受态细胞，用IPTG诱导表达。SDS．PAGEjf白=测结果表明，重 重组resistin的表达量最高。Western 特异性结合，并在分予量大小约30KD处形成特异性反应条带，表明RSTN基因已在 大肠杆菌成功表达。 的ELISA方法。结果表明，该方法具有较强的特异性和灵敏度，抗原．抗体最佳工作 浓度为I：200和1：400，resistin最低检出限量为193．75ng／mL。 为进一步研究resistin的生物学功能奠定了基础。 关键词：抵抗素(resistin)，克隆。表达，ELlSA of PorcineResistinGeneand Cloning，Expression EstablishmentofELISAMethod Abstract ResistineDNAof were RT-PCRa of gene pig amplifiedby usingpair primer toRSTN inGenBank，the was designedaccording gentsequences amplifiedfragment into and inserted vectortherecombinantWaS result pMDl8·T plasmidsequenced，The showedthattheRSTNeDNAof consisted for109 of aminoacids． pig 330bp，coding Nucleotide and sequence among mousewere homologypig，cattle，dog，human，rat between67％～87％andthearmnoacids werefoundtObe56％～79 sequence homology ％．andtheRSTNnucleotide of cameto100％．Thedate sequencespigsreported above indicatedthattheRSTNfromdiflijrentanimalshad diffi：rences． gene significant tOthe nucleotide ofRSTN of According sequence pair