猪附红细胞体病cr诊断方法的建立.pdfVIP

摘要 suis)寄生于猪红细胞表面、游离于血浆及骨髓中而引起的以仔猪发热、贫血和 黄疸，母猪流产等症状为特征的疾病。该病常和其它猪病混合发生，临床上防治 困难，给养猪业造成巨大经济损失。传统的诊断方法主要有血液涂片染色镜检和 直接血液压滴镜检；血清学诊断主要有补体结合试验，荧光抗体试验，间接血凝 试验等方法，而这些方法均有不同程度的不足点。现代化生产需要建立～种特异、 快速、敏感的检测方法。 本试验对GenBank中报道的猪附红细胞体的基因序列进行同源性比较分析， Premier 选择猪附红细胞体的保守序列作为扩增区域，利用Oli906．0和Primer 5．0软件设计筛选出合适的一对PCR引物，扩增片段为541bp，并成功的连接到 pGEM—TEasy载体上，构建了含有猪附红细胞体特异基因片断的重组质粒，经限 制性内切酶NotI酶切分析、PCR鉴定以及序列分析，验证所克隆的基因为猪附 红细胞体特异性基因，建立了猪附红细胞体病的PCR诊断方法。测得的猪附红细 胞体基因序列与广东株猪附红细胞体基因序列(AY492086)同源性为100％，与 美国株猪附红细胞体基因序列(U88565)同源性为97％。特异性和敏感性试验 结果表明，该诊断序列不能扩增出弓形虫、链球菌、沙门氏杆菌、大肠杆菌、多 杀性巴氏杆菌DNA和猪瘟病毒cDNA；当样本中猪附红细胞体DNA含量为56．25 fg／“l时，仍可扩增出清晰可辨的条带。利用PCR技术对55头份来自吉林省、 黑龙江省、浙江省的血液样本进行检查，检出率为94．5％，所建立的PCR诊断 方法具有特异、快速、敏感等优点，为猪附红细胞体病的诊断提供了一种可靠的 诊断方法。 关键词：猪附红细胞体；PCR；克隆；序列分析；诊断 EstablishmentofPCR Methodof Detecting Suis Eperythrozoon Abstract which The suisWaS suis parasite producedbyEperythrozoon Eperythrozoonosis marrowof have on surfaceandfleeinblood and swine，which erythroeyte plasma of and abortion．Thisdisease febrile，anemia，jatmdiceorigin always symptompiglets with of Wasdifficultto andcureinclinic． otherdiseaseswine．It prevention happened final a ofeconomiclossestoraise methodsof Soittookgreat pigs．Traditional and have：blood exam