禽流感病毒抗体测间接竞争elisa方法的建立及初步应用.pdfVIP

摘要 禽流感(A1)是由A型流感病毒引起的一种禽类的烈性传染病。自1878年意大利首先发现 至今，世界各地都有特定毒株引起的禽流感爆发和流行，导致禽类的大量死亡和生产性能的 急剧下降，造成了巨大的经济损失。根据流感病毒的血凝素和神经氨酸酶的抗原性差异．可 将A型流感病毒分为不同的亚型，A型禽流感病毒的HA已发现16种，NA有9种，不同的 H抗原或N抗原之间无交叉反应，给该病的防制带来了极大的困难． 由于Ml和NP是流感病毒的型特异性蛋白，是流感病毒分型的主要依据，而且它们的 基因序列在A型流感病毒各亚型之间高度保守，所以应用这两种基因表达的重组蛋白作为检 测抗原比其它抗原有很大的的优势。本研究利用原核表达的禽流感病毒的核蛋白(NP)和基 质蛋白(M1)作为检测抗原，相应蛋白免疫家兔获得的阳性血清作为AIV阳性血清的竞争 的阳性临界值。利用经Hl实验证明的多种家禽的阳性血清以及多份野生鸟类血清。对竞争 ELISA方法的敏感性和特异性进行评价，利用多份感染其他病毒的血清对竞争ELISA的特异 性进行评价并计算该方法的重复性。 血清，传染性支气管炎病血清、传染性喉气管炎血清、鸡痘血清、马立克氏病血清、传染性 法氏囊病血清的检测均显示阴性；利用M1．cELISA体系对20份经HJ试验证明A1阳性的禽 类血清以及ll份野生鸟类血清进行间接竞争ELISA检测．除一份候鸟血清的检测结果异常 禽类血清以及11份野生鸟类血清进行间接竞争ELISA检测，结果均与Hl试验相吻合。重复 清型约束一次性检测鸡、鸭、鹅甚至野生鸟类的H5、H7、H9亚型流感病毒抗体。该方法可 用于我国养禽业禽流感血清学监测，对于我们了解AIV的生态学分布及禽流感的监控、预警、 预报都有着重要的意义。 关键词：禽流感；禽流感检测；间接竞争ELISA ofa Establishment ELISA(cELISA) Competitive for DetectionofAIVAntibodies kbstract Avian oneoffatalinfectioasdiseasecausedinfluenzaAvirusinavian．It Influenza(A1)iS by first in strains morethan100 so Were appearedItaly yearsago(around1878),andfar,different foundandcaused economiclossesintheavian the important industrythroughoutworld．According 15 differenceof tothedifferenceofHAgene,whichisseparated toHl5；accordingto stypefromHl NA is 9 fromNItoN9．Itnocross-reactionbetweendifferentHA0r gene．whichseparatedstype is itiS NA。SO diffculttodetective． are MIandNP the oftheAIV-andare todetect type—specificprotein they prevalent antigens becauseofconservativeorder dif