绵羊肺腺瘤病毒膜蛋白(jsrv-env)对大鼠的致瘤性的研究.pdfVIP

摘 要 目的：为深入探讨绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白(JSRV-Env) 的致瘤性作用，以及对动 物机体各项生理指标和相关基因的影响。 方法：将真核表达质粒 pcDNA3.1-env 用体内转染试剂经尾静脉转染到幼龄大鼠 体内，在转染 21 天后采用 RT-PCR 的方法及免疫组化法检测真核表达质粒 pcDNA3.1-env 在大鼠体内的表达；在转染 6 个月内对转染大鼠进行临床指标测定， 每隔 30d 检测外周血中淋巴细胞及其亚群的动态变化以及淋巴细胞凋亡情况，同时进 行血气分析和肿瘤标志物的检测；对大鼠肺脏组织 K-ras 基因、P53 基因用 SSCP 的 方法检测基因突变情况；通过制作病理切片观察组织学病理变化。 结果：转染 21d 后真核表达质粒 pcDNA3.1-env 在大鼠肺脏组织存在表达。在转 + + 染 180d 的期间内，外周血中 CD4 和 CD8 T 淋巴细胞水平在整个过程未呈现出显著变 化；凋亡细胞水平在整个过程中没有发生明显的凋亡程度变化；血气分析结果显示 pCO 、 pO 、 Hct、 BE(ecf) 等十六项指标在不同时期与对照组比较，不存在显著性 2 2 差异。肿瘤标志物癌胚抗原 （CEA）和甲胎蛋白（AFP）检测结果均在正常范围内,转 染组与对照组比较没有发生显著变化。K-ras 基因、P53 基因没有发生突变情况。病 理组织学观察没有发现特征性病理学变化。 结论：本研究在大鼠体内检测到 JSRV-env 基因 mRNA 表达，同时可检测到 Env 基因的蛋白表达，证明已经成功的将 JSRV –env 基因转染进肺脏细胞胞浆内，而 JSRV 的Env 糖蛋白除了最初在病毒侵入细胞过程中的作用外，它还具有类似病毒致癌蛋白 的作用，能够直接刺激细胞转化，这为下一步的致瘤作用奠定了初步的基础。本实验 对转染 JSRV pcDNA3.1-env 真核表达质粒的大鼠分别进行血气分析检测，淋巴细胞 亚群变化的检测，淋巴细胞凋亡情况的检测，肿瘤标志物的检测，相关基因突变的检 测以及组织病理学检测，和对照组比较均未发现明显的变化，证实绵羊肺腺瘤病毒囊 膜基因(JSRV-env)对大鼠尚未产生致瘤性作用。其主要原因可能是绵羊肺腺瘤病毒囊 膜基因(JSRV-env)没有整合到大鼠的基因组中，从而没有达到致瘤的作用；也可能是 动物种属差异、或者是作用时间不够长造成的后果。 关键词：绵羊肺腺瘤病；免疫组化；基因突变；肿瘤标志物；流式细胞术 The studies of tumorigenigcity of JSRV-Env in rats Abstract OBJECTIVE ：To explore the tumorigenic role of JSRV-Env, and the affact for the animals body of physiological parameters and related gene. METHODS ： The eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1-env is transfected into young rats with vivo transfection reagent through tail vein injection method. After 21 days, using RT-PCR and immunohistochemical staining method to detect the eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1-env expression in rats. After that, we determinated the clinical indicators of the rats which were been transtected within six months, and detected the dynamic changes of flow cyto