莪术油注射液体对猪细小病毒抑制作用研究.pdfVIP

莪术油注射液体外对猪细小病毒抑制作用研究 摘 要 本研究旨在中药领域探讨莪术油提取方法及其注射液对猪细小病毒（PPV ）病 的抑制作用，为临床防治PPV 病提供试验依据。 试验采用超临界二氧化碳萃取（SFE）广西莪术油，得出最佳工艺条件：粒度 60 目、温度55℃、压力25Mpa 。气相质谱联用（GC-MS ）分析广西莪术油，含有 莪术醇、莪术酮、榄香烯等成分。所得莪术油，制备成终浓度为 1%的莪术油注射 液。 以1%莪术油注射液作用于PK- 15 细胞，细胞病变法（CPE ）测得最大无毒浓度 （TC0 ）为 62.5µg/mL，半数感染浓度（TC50 ）为 125µg/mL；染料法（MTT ）法测 得TC0 为28.67µg/mL，TC50 为49.33µg/mL 。根据MTT 法毒性结果设计三种不同加 药方式，以探讨莪术油对PPV 的作用机理。结果显示先加药物后加病毒的作用方式 的抑制病毒效果最好，其体外半数有效浓度IC 50 为2.813µg/mL ，90%有效抑制浓度 IC 90 为4.123µg/mL ，治疗指数为31 ；与病毒对照比较有统计学意义（P ＜0.01 ），与 阳性对照药物利巴韦林比较无统计学意义（P ＞0.05 ）。 选取先加药物后加病毒的作用方式，探讨莪术油注射液在有效浓度范围内抑制 PPV 增殖的作用规律。单因素方差分析，与病毒对照比较，在作用后2- 12h 内对病 毒的DNA 拷贝量变化无统计学意义（P ＞0.05 ），12h 后，PPV DNA 拷贝量明显低 于病毒对照组，有统计学意义（P ＜0.05 ），以65h PPV DNA 的拷贝量最大，差异极 显著(P ＜0.01) 。 超临界二氧化碳萃取（SFE）莪术能有效得到高质量的莪术油；莪术油注射液 抗病毒试验以先加药物后加病毒的作用效果最好；莪术油注射液体外对猪细小病毒 具有抑制作用，在疫苗免疫失败或有野毒感染情况下可用4.123-28.67µg/mL 莪术油 注射液进行PPV 病的防治。 关键词：莪术油注射液；PPV；SFE；实时荧光定量PCR；MTT I Inhibition Effect of Curcuma Oil Injection on Porcine Parvovirus in vitro Abstract Curcuma oil was extracted by Supercritical CO2 method (SFE method), the optimized condition is the granu larity 60, the temperature 55 ℃, and the pressure 25Mp a. The oil was extracted from Curcuma . Curcuma oil composition with GC-MS analysis had two kinds of unknown composition except curcumol, Curcuma ketone element and other components. The Curcuma oil was deluting to 1% with 2% Tween-80. Curcuma oil effect on PK- 15 cells, TC0 was 62.5µg/mL by the CPE method, and TC was 125µg/mL; TC of the MTT was 28.67µg/mL and TC was 49.33µg/mL. The 50 0