载脂蛋白b对脂肝体外模型的调控研究.pdfVIP

摘 要 载脂蛋白(Apolipoprotein ，Apo)是在分子量、免疫性及代谢上具有多态性的蛋 白质，是受体结合的识别标志，参与脂蛋白与细胞表面脂蛋白受体的结合及其代谢 过程，在脂质代谢的过程中起着极为重要的作用。本文通过体外试验，探讨了载脂 蛋白在脂质代谢的过程中的作用机理。 采用胶原酶两步灌流法获取大鼠原代肝细胞，用不同浓度的DL- 乙硫氨酸处理 24~48h ，检测肝细胞培养基中ALT ，AST 浓度和肝细胞中 TG ，apoA Ⅰ，apoB ， LDL 与HDL 的浓度。采用油红O 染色观察处理后肝细胞内脂肪滴变化情况。结果 8 显示：每只大鼠可获得(2~4)×10 个肝细胞，成活率在 95%左右，培养的肝细胞形 态完整、生长良好，可用于脂质代谢的研究。肝细胞被处理后，随着DL- 乙硫氨酸 浓度的增大，ALT ，AST 含量升高，并且随着时间延长而升高；TG 的含量增大， 相同浓度梯度下，24h 比48h 含量高； ApoA Ⅰ的含量增大，处理24h 时，模型组 各组与对照组有极显著差异（P 0.01），24h 与48h 含量没有太大变化；apoB 的含 量减小，处理24h ，48h 后，2.0，3.0，4.0，5.0mmol/L 模型组与对照组都有极显 著差异（P0.01）；LDL ，HDL 的含量增大，处理24h，48h 后，2.0，3.0，4.0， 5.0mmol/L 模型组与对照组有极显著差异（P 0.01）。油红O 染色后光镜下显示， 细胞胞浆内出现明显的脂质堆积，橘红色脂滴数量逐渐增多，有的地方染色后聚结 成片，胞核圆形，蓝染，有的细胞膜边缘已不完整，符合肝细胞脂变形态特征，与 对照组比较有显著差异（0.01P 0.05）。 通过以上试验，选用2.0mmol/LDL- 乙硫氨酸处理大鼠原代肝细胞24h ，制备脂 肪肝体外模型。不同剂量的泽泻粗提物作用于该模型，用上述测定方法，比较TG ， apoB 与LDL 浓度的变化，探求载脂蛋白在脂质代谢过程中的作用机理。结果显示： 添加泽泻的各组 TG 含量明显降低，apoB 含量升高，LDL 含量降低，24h 比48h 时效果显著。泽泻粗提物的各浓度中，以5.0µg/mL 为最佳。 为更好的研究动物性脂肪肝，首先要建立理想的研究模型。本实验成功制备了 DL- 乙硫氨酸诱导体外肝细胞脂肪变性，建立脂肪肝的动物体外模型。经过动态观 察其演变过程，能针对性地探究脂肪肝发病的细胞机理。从生化角度，利用这一技 术进一步探讨载脂蛋白在脂肪肝发病机理中的调控作用。 关键词：载脂蛋白；脂肪肝；大鼠原代肝细胞；DL- 乙硫氨酸；泽泻 Regulating metabolism of Apolipoprotein B on in vitro model of fatty liver Graduate candidate: Ying Gao Advisor: Prof. Enqiang Wang Major: Clinical Veterinary Medicine Abstract Apolipoprotein is a kind of polymorphism protein on molecular weight, immunity, metabolism, identification mark on receptor integrating, and participation in integration and metabolism on lipoprotein and its receptor of cell surface. It is important in lipoprotein metabolism. In this study, the lipid metabolism mechanism