过氧化氢对山羊子质膜功能完整性、顶体酶、获能以及核dna的影响.pdfVIP

四川农业走擘20们届硕士擘往论文 摘 要 目的：过氧化氢能够调节精子获能，并且会影响精子的其他功能以及精子核DNA 的完整性。本实验拟通过添加外源性过氧化氢，观察其对山羊精子顶体反应、项体酶 ．精子膜完整性以及DNA损坏的影响。为过氧化氢影响精子功能的机制提供一定的 理论依据。 方法：本实验主要通过检测精子顶体反应率、质膜功能完整性、顶体酶阳性率、 活率以及核DNA损伤阳性率等5个指标来反映过氧化氢对精子部分功能的影响。实 验共分为五部分，第一部分采用过氧化氢与上游法获得的优质精子共同体外孵育，来 观察不同浓度的过氧化氢对精子上述前四个指标的影响；第二部分采用201xM浓度的 过氧化氢与精子共同体外孵育，来观察添加过氧化氢后，孵育时间对精子上述指标的 影响；第三部分利用试剂盒检测精液各成分中过氧化氢的去除剂——过氧化氢酶 (cAT)的活性，通过去除精浆与添加CAT的实验从侧面证明过氧化氢对精子功能的 影响；第四部分采用20脚浓度的过氧化氢与不同山羊个体的精子共同体外孵育，来 判断过氧化氢对不同个体的精子是否有不同的影响；第五部分利用单细胞凝胶电泳实 验检测不同过氧化氢浓度下对精子核DNA的影响，以及冰箱低温保存后复温精子核 DNA损伤的情况。 结果：l、当过氧化氢浓度在10J．tM和20小之间，精子的脂膜功能完整性、顶 诱导精子获能的效果要极显著地高于其它浓度(Po．01)。当过氧化氢添加到50山vi时， 各个指标均显著下降，差异达到极显著水平(Po．01)。把过氧化氢的量最终加到100ⅢM 时，各个指标的值继续下降；2、精子在37C下孵育后，弯尾率1h组与2h组相比， 差异不显著俨o．05)。发生顶体反应的精子数量在第3h到达最大值，其它指标均在2h 时达到最大值，并且弯尾率和活率在3～4h内比在2～3小时内下降的更快；3、山羊 四川农业走擘200／届硕士学位论史 阳性率不断增加，当浓度达到50扯M时，精子核DNA损伤率达到30％以上。经过冰 箱低温保存的精子，其核DNA的损伤率随着保存时间的延长而逐渐增加，但增加幅 度不明显沪o．05)。 结论：低浓度的过氧化氢可以促进精子获能，对精子其它功能的作用不明显。高 浓度的过氧化氢会显著地影响精子的功能；在一定范围内，过氧化氢酶能很好地保护 精子。精浆作为～种天然的保护剂，对精子起到了很好的保护；低浓度的过氧化氢对 身体健康、精液质量正常的公羊的精液影响效果一致；低温保存时间对精子核DNA 影响不大，其前提是保存的精液的质量必须正常。 关键词：过氧化氢；精子质膜；顶体酶；顶体反应；DNA损伤 四j11表韭走擘2007届硕士擘住论走 Onthe ofthe peroxidefunctional Analysisimpactofhydrogen integrityofgoat membranee and DNA integrity,acrosomereaction，aerosin spermatozoa：sperm integrity Abstract 0bjeetive：Hydrogen knowntoregulate peroxide(I-12021缸e spem functionandDNA mechanisms this remain integrity．However,theunderlyingregulation unclear．Tosome tothis