野猪附红细胞体pcr检测、培养及药敏试验的研究.pdfVIP

StudyonthePCRassay,cultivationand StudyonthePCRassay,cultivationand SSttuuddyyoonntthheePPCCRRaassssaayy,,ccuullttiivvaattiioonnaanndd drugsensitivitytestofWildboar drugsensitivitytestofWildboar ddrruuggsseennssiittiivviittyytteessttooffWWiillddbbooaarr Eperythrozoonsuis Eperythrozoonsuis EEppeerryytthhrroozzoooonnssuuiiss ADissertationSubmitted to Shihezi University Shihezi University SShhiihheezzii UUnniivveerrssiittyy InPartialFulfillmentoftheRequirements fortheDegreeof MasterofNaturalScience MasterofNaturalScience MMaasstteerrooffNNaattuurraallSScciieennccee By By BByy Yuyingqi Yuyingqi YYuuyyiinnggqqii DissertationSupervisor:Hegaoming June,2013 摘 要 目的：猪附红细胞体病是由立克次氏体目中的附红细胞体引起猪的一种以急 性黄疸性贫血和发热为特征的传染病。为有效的建立附红细胞体病在野猪方面的 综合治疗方法，该研究通过对野猪附红细胞体的分离、培养、分子生物学与血常 规诊断、药敏试验与治疗效果分析，表明野猪感染附红细胞体与家猪有很高的同 源性，并且筛选出了强力霉素药物对野猪附红细胞体感染有较好的治疗效果，为 野猪附红细胞体的治疗提供理论与技术支持。 方法：(1)采集疑似附红细胞体病的野猪血液，提取基因组DNA，按照 GenBank 发布的猪附红细胞体的16S rRNA 的保守区域设计引物，经PCR扩增 的DNA片段，将其克隆入pUC-18载体，通过酶切、特异性试验以及序列分析证 所得DNA基因片段。(2)以PPLO、灭活牛血清按一定比例混合作为野猪附红细 胞体病原的基础培养基，并添加霉形体、M-199培养基、RPMI-1640三种不同 的培养基，接种野猪自然感染附红细胞体的红细胞，置于37℃、含5%CO 培养 2 箱中培养，定时更换培养孔中的上清部分培养液，分别按预定对附红细胞体的染 虫强度、虫体颗粒大小、运动特点进行观察，染虫数进行记录，分析不同培养基 的优劣。根据添加不同比例血清的和连续传代培养，筛选出培养附红细胞体的最 佳条件。(3)利用体外培养确定的条件，选择贝尼尔、盐酸土霉素、磺胺间甲氧 嘧啶钠、红霉素、强力霉素、盐酸吖啶黄等几种药物进行药敏试验，经一定时间 的培养观察后，综合评价其中效果最好的药物