鉴别犬瘟热病毒毒株和弱毒株的复合rt-npcr方法的建立及初步应用.pdfVIP

摘 要 犬瘟热(Canine distemper，CD)是由犬瘟热病毒(Caninedistempervirus，CDV)感染犬 或其它食肉目动物引起的一种高度接触传染性、致死性疾病，CDV属于副粘病毒科麻疹绢毒属， 该属成员还包括麻疹病毒(MV)和牛瘟病毒(RPV)．CDV是负链单股不分节段的RNA病毒， 基因组全长15690nt，主要由N基因，P基因，M基因，F基因，H基因，L基冈组成，只有一 个血清型。 上登录的所有CDV基因组全序列，选择CDV强、弱毒株间有差异区域，选择其高度保守区设计 了一对通用引物Pl和P4，并在该对引物跨越区域的内部设计了CDV强毒株特异性引物P2及弱 立了一种能区分CDV强、弱毒株的复合RT-nPCR的鉴别诊断方法。应用该方法从CDV强、弱 毒株的基因组中分别扩增出了大小为247bp和177bp的特异性片段，从两种病毒基因组混合物中 X 照组进行复合RT-nPCR扩增时均为阴性．该方法敏感性为可以检测到相当于1 101TCID；o的病 毒RNA。检测耗时短，最快可在6h内完成。对从黑龙江省及吉林省采集的30份疑似CD病料(分 别来自于犬、狐、貉的脾脏，肝脏、肺脏、膀胱)进行了检测，结果表明，有20份为CDV，其 中15份为CDv强毒株，5份为CDv弱毒株。 表性的CDV毒株进行H基因序列分析，结果显示，复合RT-nPCR的检测结果是准确的；并且目 前CDV各病毒株之间由于地域性及年代的不同，主要可区分为强毒株与弱毒株两个基因型，其 北极型(Arctic)等五种基冈型。我国有3株流行野毒(giant 型，l株流行野毒(Liu)属于Arctic型，HLJ一1、Hu-2均属丁：Asia-2型。 本研究建立的复合RT-nPCR可以检测CDV感染，并能作为强毒株、弱毒株的鉴别诊断方法， 可用于临床快速检测，流行病学监测． 关键词犬瘟热病毒，复合RT-nPCR，鉴别诊断，基因型，序列分析，H基因 Abstract Canine a andfataldisease orother animals distemper(CD)ishighlycontagious ofdogs furry by canine virus(CDV)．whichisa RNAvirus tothe distemper single-strandednegative belong Morbilliviruswithinthe membersofthe aremeasles genus paramyxoviridaefamily．Other genus of 15690 CDVis ntin virus(MV)andriderpestvirus(RPV)．Thegenome approximatelylength， has characterized． whichcontainsome one been genessuch勰N，P．M，F，H，L．Thereserotype only A IU：nPCRmethodwas furthedetectionanddifierentiationof multiplex developed wild—type