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第五章 微生物的生长繁殖与生存因子 第一节 微生物的生长繁殖 3、微生物的发育——微生物的生长与繁殖是交替进行的，从生长到繁殖，是微生物的构造和机能从简单到复杂、从量变到质变的发展变化过程，这一过程称为发育。 4、世代时间(代时)——指微生物（如细菌）的两次细胞分裂之间的时间。包括细胞核物质和细胞质加倍增长，然后平均分配到两个新细胞中。 每一种微生物在一定的培养条件（如营养组成、pH、温度和通气等）下，其代时是一定的；当环境条件发生改变，其代时也会改变。 不同种的微生物生长繁殖速率不同，其代时也不同：原核微生物的代时﹤真核微生物的代时；好氧菌的代时﹤专性厌氧菌的代时 5. 多细胞微生物的生长繁殖 生长：细胞数目增加，个体数目不增加。 繁殖：细胞数目增加，个体数目也增加。 二、研究微生物生长的方法 微生物的生长可分为个体微生物的生长、群体微生物的生长。通常通过培养研究微生物的群体生长（以微生物群体作为研究对象，来研究它们的生长）。培养方法大体上可以分为两种情况： 一种是分批式培养（间歇式培养），培养基一次性加入，不更换 ；另一种是连续式培养。 一般通过测定细菌重量或数量随培养时间延续的曲线关系来考察细菌的生长特性。 （一）分批培养和生长曲线 1、分批培养（间歇培养）概念：是将一定量的微生物接种在一个封闭的、盛有一定量液体培养基的容器内，在适宜的条件下培养（保持一定的温度、pH和DO），微生物在其中生长繁殖；结果出现微生物的数量由少变多，达到高峰后又由多变少，甚至死亡的变化规律（微生物的生长曲线）。 2、生长曲线 用坐标法作图，以培养时间为横坐标，以计数获得的微生物数量的对数为纵坐标，可以绘出一条定量描述液体培养基中微生物生长规律的实验曲线，该曲线则称为生长曲线。（ growth curve )。 生长曲线的制作 生长曲线 （1）停滞期（迟滞期、调整期、适应期） 当细菌被接种到新鲜培养基中，开始一段时间内，通常不立即进行细胞分裂、增殖，生长速率近于零，细胞数目几乎保持不变，甚至稍有减少，这段时间被称为停滞期。 在实际工作中如接种菌种以启动新的水处理设施，投加新鲜污泥时，接种的细菌不习惯于新环境，会出现或长或短的停滞期，停滞期的出现会增加操作时间，降低工作效率。 可以通过增加接种量、采用最适种龄、选用繁殖速率快的菌种以及尽量保持接种前后所处的培养介质和条件一致等方法来缩短或消除停滞期。 （2）对数期（指数期） 特点 对数期的细胞分裂速度最快、生长速率常数最大、繁殖一代的时间（世代时间）最短、代谢活动最旺盛、对环境变化敏感。 细胞内的核糖体等组分也像细胞数目一样以同样的对数生长速率增加，细胞合成核糖体以及蛋白质越多，其生长速率也越快。 细胞化学组分、菌体大小形态、生理特征等比较一致 对不良环境因素的抵抗力强 ①由于此时期的菌种比较健壮，生产上用作接种的最佳菌龄； ②发酵工业上尽量延长该期，以达到较高的菌体密度 ③食品工业上尽量使有害微生物不能进入此期 ④是生理代谢及遗传研究或进行染色、形态观察等的良好材料。 （3）静止期 如果对数期的细胞分裂不受节制的连续进行，理论上一个代时为20min。重10-12g的细菌，经过48h的对数生长之后，其群体重量可达到地球重量的4000倍。 在一个封闭的系统中，细菌的对数生长只能维持一个短暂的时期，最终生长将会降低，代时延长，细胞活力减退。此时新生的细胞数目与死亡的细胞数目相等，总菌数达到最大值，活菌数保持恒定。 静止期细胞从生理上的年轻转化为衰老，表现为细菌的代谢活力钝化，细胞含有较少的核糖体，RNA和蛋白质合成缓慢，mRNA的水平低下，因此细胞的生长变得不平衡，细胞的形状有的也发生改变。因不能维持细胞壁的合成与修复，细胞的染色特点也发生变化，如G+转变为G-。 特点： ①新增殖的细胞数与老细胞的死亡数几乎相等，微生物的生长速率处于动态平衡，培养基中的细胞数目达到最高值。 ②细胞分裂速度下降，开始积累内含物，芽孢杆菌开始产芽孢。 ☆对于发酵生产来说，一般在稳定期的后期产物积累达到高峰，是最佳的收获时期。 原因： 对数期消耗了营养物质，使其浓度降低； 有害代谢废物的大量积累(酸、醇、毒素等)； 营养物的比例失调，如碳氮比不合适； 理化条件(pH、DO、氧化还原势等)有所改变。 （4）衰亡期 处于静止期的细菌继续培养，细胞的死亡率将逐渐增加，最终群体中活的细胞数目将以对数速率急剧下降，此阶段就被称为衰亡期。 特点 衰亡期的长短与对数生长期一样在不同微生物中变化是很大的，主要与菌种的遗传特性有关。 通过补充营养和能源，以及中和环境毒性，可以减缓死亡期的细胞死亡速率，延长细菌培养物的存活时间。 分批培养的应用：序批式间歇