直接利用糖质原料生产L-丝氨酸菌株的选育.pdfVIP

直接利用糖质原料生产L-丝氨酸菌株的选育1 1, 2 1 1 1 1, 2 * 徐国强 ，张晓梅 ，窦文芳 ，许泓瑜 ，许正宏 1 江南大学医药学院制药工程研究室，江苏无锡 (214122) 2 江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡 (214122) E-mail ：cliff908xp@126.com 摘 要：以一株能直接利用糖质发酵生产 L- 丝氨酸的谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum )SYPS062 为出发菌，经硫酸二乙酯（DES ）逐级诱变处理，在D-丝氨酸抗性梯 度平板上挑取正突变株，获得一株遗传性能稳定的突变株33a-18 ，可积累L-丝氨酸11.0g/L， 较出发菌株提高了65.4%。 关键词：谷氨酸棒杆菌；诱变育种；L-丝氨酸 L-丝氨酸是一种重要的氨基酸，在医药、食品、化妆品中均有较为广泛的应用[1] 。目前， 国内外生产L-丝氨酸的主要方法是以甘氨酸为前体物，通过微生物酶法转化生产[2] 。但是， 由于前体物质甘氨酸价格昂贵，前体发酵法成本较高，直接发酵法生产L-丝氨酸成为国内外 研究的热点。选育一株能直接利用糖质高产L-丝氨酸的菌株，具有十分重要的意义。新疆农 科院微生物研究所付建红等通过诱变获得抗丝氨酸结构类似物和分解能力缺陷的突变株 S112，L-丝氨酸产量是1.6 g/L[3] 。Petra Peters-Wendisch 等分离鉴定L-Ser代谢路径的关键酶， 包括3 －磷酸甘油酸脱氢酶（PGDH ），L-丝氨酸羟甲基转移酶（SHMT）和L-丝氨酸脱氢酶 （L-serDH ），如图1所示。在此基础上构建了能够直接利用蔗糖发酵生产L-丝氨酸的重组菌， [4] L-丝氨酸产量为86mmol/L(9.04g/L) 。 蔗糖／葡萄糖 PGDH 3-磷酸甘油酸 磷酸羟基丙酮酸 L-SerDH SHMT 丙酮酸 L-丝氨酸 甘氨酸 进一步胞内代谢 图1 Corynebacterium glutamicum L -丝氨酸代谢途径简图及代谢途经中的三个关键酶 P.Peters-Wendisch等研究发现PGDH 的一段氨基酸残基能与L-丝氨酸结合，使得高浓度的L- 丝氨酸能够抑制PGDH 的活性[5] 。L-丝氨酸的几种常见结构类似物是Phosphoserine ， 1本课题得到 973 课题（2007CB707804 ）、国家“863”项目（2006AA020104 ）及教育部新世纪优秀人才支 持计划（NCET-07-0380 ）的资助。 - 1 - Acetylserine ，D-serine ，L-cysteine 以及L-ysophosphatidylserine[6] 。因此可以通过筛选D-丝氨 酸抗性突变株来遗传性地解除L-丝氨酸对PGDH 的反馈抑制，进而积累L-丝氨酸。 本文以一株能直接利用糖质原料发酵生产L-丝氨酸的谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutam icum )SYPS062为出发菌株，经硫酸二乙酯（DES ）诱变处理，以一定浓度D-丝氨酸 进行抗性筛选，获得一株能高产L-丝氨酸的菌株33a-18，L-丝氨酸产量达11.0g/L，并与出发 菌株进行了生长及发酵的比较。 1 材料和方法 1.1 菌种 C. gluta