j亚群禽白血病血清学调查和安徽分离株ah092特性研究.pdfVIP

摘 要 禽白血病（Avian Leukosis，AL ）是由反转录病毒科甲型反转录病毒属禽反转 录病毒引起的一种禽类多种肿瘤性疾病的统称。此病在世界各国鸡群中广泛流行， 引起鸡死亡和消瘦、生长发育不良，同时引起机体抵抗力下降和免疫抑制，是危害 养禽业的主要疾病之一。国外一些养殖业较发达的国家通过淘汰患病鸡群，减少垂 直传播从而达到净化种群的目的。 本研究使用IDEXX ALV 抗原及抗体检测试剂盒对安徽地区鸡场祖代鸡和农贸 市场商品鸡采集的样本进行检测，同时结合临床送检病例对安徽省禽白血病的感染 情况进行调查。结果发现存在禽白血病的感染情况，在368 份血清样品中，147 份 血清样品为ALV-J 抗体阳性，仅有34 份血清样品检测为ALV-A、B 抗体阳性，26 份样品同时检测出3 种抗体阳性，说明ALV 存在着A、B 、J 三种亚群的混合感染。 经 ELISA、IFA、PCR 检测及测序鉴定，从阳性泄殖腔样品和送检病例中分离出6 株病毒，依次命名为AH09/2 和AH002～AH006 。 使用 PCR 方法对 ALV-J 分离株gp85 基因进行扩增和测序，序列分析表明， AH09/2 株与USA 2001 和ALV-J 原型株HPRS-103 同源性最高，分别达到96.5%和 97%，AH002～AH006 与HPRS-103 株的同源性均在95% 以上；同国内其他地区的 分离株相比同源性为87.5%～96.1%，而与A、B 、C、D 亚群的同源性仅为9.2%～ 11.9%。gp85 基因是ALV-J 变异程度最大的基因，尤其是野毒株gp85 基因变异程 度更大，序列分析的结果显示分离株与国外毒株具有很高的同源性，表明该病毒株 很大可能是通过祖代种鸡垂直传播而来而，野毒感染的可能性较小。 将AH09/2 株gp85 基因序列克隆至pGEX-6p- 1 原核表达载体，进行GST-gp85 融合导蛋白的表达，经SDS电泳后可观察到大小为61KD 的目的蛋白。通过 Western-blot 证明表达产物能与ALV-J 阳性血清及ALV-J env 基因单抗发生特异性反 应。融合蛋白经纯化后，建立了ALV-J 抗体 ELISA 间接检测方法，应用该方法对 临床血清样品进行检测，结果表明，已建立的间接ELISA 方法与进口IDEXX 试剂 盒检测结果阳性和阴性符合率分别可以达到85%和70.97% 。 将分离株AH09/2 经皮下注射和滴鼻2 种途径接种于3 日龄以内雏鸡（NDV HI 2 ＜2 ），然后于7 日龄进行新城疫IV 苗免疫，免疫一周后 （ALV-J 感染组NDV HI 2 4 5 ＜2 ，对照组2 ＜NDV HI＜2 ）用新城疫强毒HN3 株对实验组样本攻毒。试验结果 显示，ALV-J 感染组的新城疫抗体水平明显低于正常对照组，并在新城疫病毒攻毒 以后出现呼吸道症状、神经症状和提前死亡。同时其体内IL-2 、IL-6 和IFN-γ 水平 也低于同时期的对照组，而且也没有产生ALV-J 的特异性抗体。表明该毒株对疫苗 I 免疫具有明显的抑制作用可造成疫苗免疫失败。细胞因子水平低下可间接说明病毒 已经影响到免疫细胞的成熟和正常分泌细胞因子的功能，造成机体免疫抑制，对外 界病原的易感性增强而免疫应答能力下降。 关键词：J 亚群禽白血病；血清学检测；生物学特性；免疫抑制 II ABSTRACT Avian Leukosis is a general designation of a variety of avian neoplastic diseases caused by Avian Leukosis Virus, which widespread by vertical and horizontal transmission in chicken flocks around the world. Avian Leukosis can cause fl