免骨髓间充质干胞分离培养及定向分化的研究.pdfVIP

河南农业大学201l届硕士研究生论文 兔骨髓间充质干细胞体外培养及分化为脂肪细胞的研究 摘 要 marrow stem 骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymalcells，阴SCs)起源于中胚层， stem 主要存在于哺乳动物的骨髓中，与造血干细胞(Hemopoietic 不仅参与构建造血微环境，发挥支持造血的作用，而且易于体外分离培养和扩增、可自体移 植并具有跨胚层分化为多种细胞类型的能力，未分化的或经遗传修饰过的BMSCs有望成为未 来细胞／基冈治疗、组织：r=程的理想种子细胞。本研究目的在于阐明兔BMSCs的生物学特性， 优化兔BMSCs的增殖培养条件，并研究其分化为脂肪细胞的潜能，以便未来利用该类细胞作 为疾病细胞和基冈治疗的模型。为此，本试验利用一月龄日本人白兔为对象，较为系统全面 地研究了其BMSCs的分离、培养、扩增、鉴定、形态学、生长特性及体外诱导分化能力，为 进一步深入研究BMSCs的诱导分化和应用打下实验基础。 1．本试验应用红细胞裂解液法，根据骨髓间充质干细胞在培养瓶中贴壁生长的特点，成功 分离得到兔股骨和胫骨MSCs，体外培养至第7代。本试验所分离的兔BMSCs，增殖能力强，体 外适应性较好，通过绘制细胞生长曲线、测定24h贴壁率得出，随着传代次数的增多，增殖 能力下降，贴壁时间延长，选川前4代传代细胞作为进一步的研究对象最为合适：经免疫组 兔BMSCs，为进一步的实验奠定基础。 2．本试验通过四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)比较不同培养基及血清浓度对兔BMSCs生 u 增殖的作川，其促增殖效应与其质鼙浓度关系密切：520g／g效应不明显(FO．05)， ii 在40～100 p g／L时促增殖效应显著(尸0．05)，在80g／L时其促增殖效应最强(尸 ％相比明显增加(P0．01)。 3．联合应川地塞米松、胰岛素体外诱导兔BMSCs向脂肪细胞分化，诱导7d后细胞内有脂滴， 随着时间延K，脂滴逐渐增加并融合为脂泡，细胞体积逐渐增人由原来的K梭形变为椭圆形 或多角形，胞核被挤向一侧，油红0染色早圈I性，从而建立了MSCs分化为脂肪细胞的模型， 有助丁．研究肥胖发生的机制。同时，这也是和骨髓造血干细胞的区别之一。 关键词：骨髓间充质干细胞：碱性成纤维细胞生K冈子；脂肪细胞；分化；兔 河南农业人学201l届硕上研究生论文 THESTUDYoFRABBITBoNEMARROW STEMCELLSCULTUREAND INDUCATIoNTo Supervisor：Prof．WangXinzhuang Xiaoe Master(Ph．D)Candidate：He ABSTRACT stem from in mesoblast，resides Mesenchymalcells(MSCs)originating mainly mammalianbone coexistswith stem marrow，and hematopoieticcells(HSCs)． bonemarrow stem exertsthe Functionally mesenchymalcells(BMSCs)n