牛源s.aurus的分离、鉴定及其粘附因子fnbp和clfa的克隆与表达.pdfVIP

摘 要 奶牛乳房炎是由各种病因引起的乳房炎症，它造成的经济损失非常巨大。尽管各国 兽医工作者多年来对该病的预防与治疗研究付出了极大的努力，但仍无满意的结果，至 今仍以抗生素治疗为主。由于抗生素残留和耐药菌株的出现造成奶品质下降和治疗困 难，所以迫切需要研究新的预防与治疗方法。病原学调查表明，金黄色葡萄球菌 aureus S．A)是引起奶牛乳房炎的主要病原因子，而目前只有大肠杆 (Staphylococcus 菌的研究取得成功，保护率达到85％。但有关葡萄球菌属，尤其是金黄色葡萄球菌相关 疫苗少见，因此，目前迫切需要对葡萄球菌菌苗的进行研究，以期能够投入临床，造福 社会。传统的灭活疫苗和弱毒苗效果不理想，因此本研究利用基因工程方法，克隆并原 核表达了奶牛乳房炎主要致病性葡萄球菌的抗原基因…黏附因子clfA、FnBP，为进一 步研究奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌在乳腺组织(乳导管)的黏附、定植生长及FnBP和 ellA两个基因一起协同作用感染家畜的分子生物学机制提供了理论依据，同时也为开发 奶牛乳房炎基因工程疫苗及其佐剂的研制提供了新的思路和方向。 本实验从动物源(奶牛)身上分离得到金黄色葡萄球菌，再从金黄色葡萄球菌中筛 Resistant 选得到耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin 重组表达金黄色葡萄球菌FnBP、clfA基因，为进一步免疫学研究提供目标蛋白，并且 为研究治疗奶牛乳房炎用药提供了理论依据，从而为DNA疫苗等的研发提供了方向。 按常规方法复苏菌株，用血浆凝固酶试验重新鉴定SA。用KB法、琼脂筛选法、生化 金黄色葡萄球菌(SA)62株，MRSA13株占金黄色葡萄球菌(SA)的20．10％，2株未确检。 blot分析 质量为58kDa／45kDa的新蛋白带。Westernblot分析显示，FnBP、clfA蛋白均可与金 黄色葡萄球菌多克隆抗血清发生特异性反应。新疆兵团部分垦区牛场乳房炎奶样中 关疫苗的研究奠定了基础。 关键词：牛源金黄色葡萄球菌， MRSA，抗原基因，黏附因子， 克隆与原核 表达 Abstract Bovine mastitis，allinflammationofthe themost factor mammary#and,isimportant toeconomiclossesinthe researchersworkhardallover contributing dairyindustry．Although theworld，thereisno methodto it．The good controlmostcontrolmethodis antibiotics． using Itis tocreatemethodinordertocontrol a necessarynew mastitis,becausentibioticsnot only haveside itCandecreasemilk isthebest quality．Certainly，vaccine effec．t，also prevention for showedthat