猪乳铁蛋白基因隆、表达及其产物对断奶仔猪生长、免疫和抗菌肽基因表达影响的研究.pdf

摘 要 基因，采用杆状病毒一昆虫表达系统在家蚕蛹中表达了重组猪乳铁蛋白(rPLF)，研 菌群和小肠形态以及抗菌肽基因表达的影响。主要研究结果如下： 的基因，然后再通过两片段拼接的方法克隆出全长PLF基因，电泳分析显示， 克隆PLF目的基因。 SDS—PAGE 构建了PLF基因重组杆状病毒，在Sf9细胞中繁殖，并感染家蚕蛹； 检测结果表明，蚕蛹细胞裂解产物中有一分子量为80kD左右的特异性条带，进 一步进行westernblot检测，在特异性条带对应位置也有相应条带，且特异性 条带的分子量也在80kD左右，结果显示，PLF基因在家蚕蛹内得到了表达。 小时就表现出了抗菌肽活性，4小时、8小时、16小时和24小时的抗菌活性明 的空白对照蚕蛹相比，两者抗菌活性没有发生明显差异：但含rPLF蚕蛹经胃虽 白酶水解后。其抗菌活性比未被酶解的含rPLF蚕蛹有显著提高(PO．01)。 验，结果表明，在断奶前期，饲粮中添加rPLF比对照组腹泻率降低了 日增重和降低料重比的效果上，在断奶前期的效果优于断奶后期。 5．杜长嘉断奶仔猪饲养30天后，各处理组取3头体重相近小母猪进行屠宰，取血 样分离血清，进行T．淋巴细胞转化实验、免疫球蛋白测定、及IL一1和IL一2以及 血清铁和总铁结合力的分析：取脾脏，进行细胞培养，研究脾脏淋巴细胞在PHA 和第30天，各处理组取3头体重相近小母猪进行屠宰，取血样和脾脏，进行相 关指标测定与分析，研究结果表明，rPLF均显著提高了杜长大仔猪血清中T-淋 6．杜长大断奶仔猪饲养第15天后，各处理组取3头体重相近的小母猪进行屠宰， 取结肠内容物，进行肠道菌群分析，取十二指肠和空肠，制电镜切片，观察小肠 绒毛隐窝的变化。肠道菌群结果表明，在对致病菌影响上，饲粮添加rPLF减少 显改善了仔猪十二指肠和空肠的绒毛高度和密度。 7．杜长大断奶仔猪在饲养第15和第30天后，各处理组分别取3头体重相近的小母 研究饲粮添加rPLF对断奶仔猪骨髓抗菌肽基因表达的影响。研究结果表明，与 仔猪非特异性免疫因子抗菌肽发育上存在阶段性差异，在断奶河期优于断奶后 期。 关键词： 乳铁蛋白 基因克隆 表达 仔猪抗菌肽 免疫生长 2 塑堡查堂竖主堂丝迨壅!主墓苎塑鲨———————————————一 Effect and Gene Lactoferrin and ofPorcine Expression Cloning andGene on Products of Growth，Immunity Expression ofAntimicrobial Expression peptide in Pigs Weanling from cellsof Porcine