猪链球菌2型mp和sspa抗原表位预测与表达及其免疫特性.pdf

猪链球菌2型MRP、sspA抗原表位预测与表达及其免疫特性 摘要 suis 本研究的目的在于获得可抵御强毒猪链球菌2型(streptococcustype 2,SS2)感染的保护性抗原肽，并分析其免疫特性，以期为研制低毒、高效的 SS2蛋白亚单位疫苗提供科学依据。 选取具有保护性或者具有重要免疫作用的蛋白一一溶菌酶释放蛋白 (muramidase．released serine 避开蛋白的毒力结构域、舍弃信号肽段、去除膜锚定结构域和处于膜内(胞浆) 的肽段。运用蛋白分析软件ANTHEPROT5．0对蛋白的二级结构(螺旋、折叠、 转角、无规卷曲)和B细胞表位进行综合预测与分析(亲水性、疏水性、抗原 6．0 性、跨膜结构、溶剂可及性等)，确定蛋白的B细胞优势表位簇。使用Oligo 和Primer 5．0设计出两端带合适酶切位点的引物并通过PCR获得预测的抗原肽 段基因，酶切连接插入原核表达载体pET32a，导入表达菌株BL21表达菌株， 构建重组抗原的原核表达系统。IPTG诱导表达，以渗透性休克法和热休克法纯 化重组蛋白；使用灭活SS2免疫血清Westernblot检测重组蛋白的免疫原性及 其与SS2免疫血清的反应性。纯化的重组蛋白免疫雌性SPFCDl小鼠检测其安 全性，用强毒SS2SDLVDU株攻毒重组蛋白免疫小鼠，评估重组蛋白的免疫保 护效力。 胞优势表位簇。构建了上述肽段基因与pET32a的原核重组表达系统，重组蛋 白可溶性表达，微量蛋白测定仪测定表达量为10 blot显示重 me；mL；Western 组蛋白具有良好的免疫原性和反应性；免疫安全性试验表明，MRP和sspA重 小鼠的免疫保护率为40％，为菌体免疫所提供保护率的50％；sspA的91～323aa 肽段重组蛋白虽然对小鼠不产生保护力，但是可以延缓小鼠的死亡时间，与 作用。 关键词：猪链球菌2型：溶菌酶释放蛋白；枯草杆菌素样蛋白酶； B细胞表位；原核表达；免疫保护 Abstract the determinantof release This focus antigenic MRP(1ysozyme study prepotent of serine Can theinfection against protease)，which sspA(subtilisin．1ike protein)and suis 2)． type SS2(streptococcus ofSS2in MRPand Can forceand theinfection sspAprovideprotection against aminoacid informationandstructural the intheliterature．Getthe sequence