胸膜肺炎放线杆基因组表达文库的构建及其免疫保护性抗原基因的筛选.pdf

摘 要 猪传染性胸膜肺炎(porcine (Actinobacillus 猪业造成了巨人的经济损火。在我国目前土要应川传统的灭活疫苗对该病进行预防，但 APP有15个血清型，灭活疫苗免疫猪只能提供抵抗同一血清型菌株感染的能力，对其 他菌株的感染没有或仅有较弱的保护。冈此，研制高效的疫苗已成为研究热点。目前。 儿种纯化的抗原包括Apx毒素、脂多糖和外膜蛋白已经作为疫苗候选，然而每种抗原只 能提供有限的保护力，表明一种有效的交义保护性疫苗可能包括儿种抗原。研制有效的 胸膜肺炎疫苗的有效办法是疫苗中包括尽可能多的特征性重组抗原。本研究廊州表达文 库免疫(ExpressionLibrary 免疫保护性抗原基冈，为研制新刑疫曲奠定基础。 本试验以我国流行的胸膜肺炎放线杆凶7型25．4地方分离株为研究对象，提取细菌 基冈组，川限制性核酸内切酶MboI将基冈组部分酶切，同收人小为0．5～2．5kb的DNA 片段，将其与经同尾酶BamH I切割并去磷酸化的真核表达载体pcDNA3．1连接，转化人 然后麻川表达文库免疫(ELI)的方法，将10个文库提取的重组质粒纯化斤，分别免疫 X 疫3次，免疫间隔3周，3免结朱后2周对小鼠攻以APPl刑强毒。攻毒剂楚为5l 09cfu／ 只，观察各组小鼠在攻毒斤20天内的存活率，并在攻毒后第6天无菌采取小鼠左全肺计 算肺组织荷菌数(cfu／mg)，从相对保护率、肺脏荷凶数雨I组织病理学变化二方面评价文 序抵抗APPl型凶感染的交义保护力，选出保护力好的两组文库L2不IL3，每个重新分 X1 疫结束后对小鼠攻以APPl型强毒。攻毒剂鼙为509cfu／只，从相对保护力、肺脏荷凶 数、组织病理!学3方面综合评价弧文库的抵抗APPl型强毒的交义保护力，最后选出保 护力最女r的一组弧文库L3．4，挑选20个菌落进行核茁酸洲序，测序结果上州NCBI的 BLAST做序列比对，共得剑1 frame，ORF)，其中的腺 3个开放阅读框(openingreading 茁酸环化酶基冈以及膜蛋白cbiK、cbiL可能是毒力相芙基冈。 关键词胸膜肺炎放线杆卤：基冈组表达文库；小鼠；免疫保护作刖：开放阅读框 Abstract Actinobacillus the pleuropneumoniae(APP)iscausativeof i Re agent pore severe diseaseof pleuropneumonia(PCP)，a whichcauses contagious pigs important worldwideeconomiclossesinthe pig resent，killedwhole．celI industry．Atp vaccines are to PCPin applied China．APPhas1 5 prevent killedwhole．ceII serotypes，each vaccines only provideserotypespecific