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抗菌肽基因合成与植物表达载体的构建 摘要 抗菌肽是自然界中的广泛存在的生物体先天免疫效应因子，因其具有 广谱抗菌、杀菌力强、非特异性杀菌、不易使病原体产生抗性等特点而倍 受科学家的关注。本研究主要从事抗菌肽基因的合成与植物表达载体的构 建，为将来应用于甘蔗遗传转化做准备。本论文主要的内容有： 1)设计引物利用PCR技术扩增得到抗菌肽基因片段并将其克隆进载体， 测序结果表明PCR扩增得到的产物因存在缺失、倒置、突变、插入等现象 而不能在下一步的实验中加以利用； 9 2)将适合单子叶植物遗传转化的Ubi启动子连接入克隆载体pucl 并两端测序，证实本室保存的Ubi启动子与GENBANK上发布的序列具有很 高的同源性，可以用于植物表达载体构建； 3)用甘蔗偏爱的密码子设计了分泌型抗菌肽基因Ms卜99并在其后设 计了Nos终止子，在全基因合成得到该基因后在其前面连接上Ub；启动子， 将Ubi—Ms卜Nos连接到质粒pcA惦I2301的多克隆位点上构建得到植物表 达载体； 4)进行了甘蔗愈伤组织对甘露糖抗性筛选实验，发现培养基中仅含 甘露糖而且浓度为309／L的条件下愈伤组织仍然有少量增长，建议增加甘 露糖的浓度直至愈伤组织不能继续生长，以得到最佳筛选浓度。 关键词：抗菌肽Ubi启动予植物表达载体构建甘露糖筛选 SYNTHESIS0FANTIBACTERIALPEPTIDEGENEAND CONSTRUCTIONOFPLANTEXPRESSIONVECTOR ABSTRACT Antibacterial ill c锄befound t11enature．Fornleirwide peptides widely andc觚cer are spectnllnactiV毋agambacteri“，如ngi cells，sciemists intereStedinmeir inmedicineand potentialadV觚tages agriculture．Thepresent i11打oduceds啪eresultsofantibacterial and syntllesis p印er peptidegene plallt vector couIdbet11ebasefor向ture expressioncons饥1ction，which sugarcane genetic协msfomation 1 An PCR antibacterial peptidegenewas锄plifiedbywith铆。皿mers， whichcoVeredthewholea11dannealedtoeachomer．However也e gene gene couldnotbeusedintIle劬ureworkforthe re、，ealedmatthePCR